[發(fā)明專利]人源抗狂犬病毒中和性基因工程抗體

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00132570.1
• 申請(qǐng)日: 2000-11-29
• 公開（公告）號(hào): CN1355253A
• 公開（公告）日: 2002-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁米芳;候云德;張世珍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C07K16/08
• 分類號(hào): C07K16/08;C12N15/63;A61K39/395;A61P31/12
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• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及預(yù)防和治療用人源基因工程單克隆抗體的制備及應(yīng)用，尤其是特異性針對(duì)狂犬病毒糖蛋白的中和性基因工程單克隆抗體。

自1975年B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞融合技術(shù)問世以來，單克隆抗體作為一類用于基礎(chǔ)研究，實(shí)驗(yàn)室診斷，臨床治療和預(yù)防的新型產(chǎn)物，其運(yùn)用價(jià)值和開發(fā)前景已獲得普遍的肯定。分子生物學(xué)和分子免疫學(xué)的研究發(fā)展導(dǎo)致了基因工程抗體的產(chǎn)生和發(fā)展。通過抗體分子基因水平的重組可獲得多種多樣的特異性鼠源及人源抗體，使對(duì)單克隆抗體的研究有了突破性進(jìn)展并越來越顯示出其重要意義及實(shí)際運(yùn)用前景。80年代末90年代初興起的噬菌體抗體基因庫技術(shù)興起和整個(gè)基因工程抗體技術(shù)研究領(lǐng)域的發(fā)展，使當(dāng)今世界人源或基因工程抗體的開發(fā)研究取得很大進(jìn)展并已由基礎(chǔ)研究階段步入實(shí)質(zhì)性應(yīng)用研究和開發(fā)階段。目前美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市或待批的生物制品中，各種形式的單克隆抗體和基因工程抗體占到一定比例，目前以批準(zhǔn)上市的67種生物制品中，治療和預(yù)防用單克隆抗體和基因工程抗體共有9種。正在待批中等抗體有54種。其中已批準(zhǔn)上市并且產(chǎn)生巨大經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益的四種人源化基因工程抗體中，其中有一種即為抗病毒基因工程抗體，其商品名為“Synagis^TM″，為人源化抗呼吸道合病毒(RSV)基因工程抗體，而來源于噬菌體抗體庫篩選的人源抗RSV病毒基因工程抗體已被批準(zhǔn)進(jìn)入II期臨床，另一種抗病毒抗體抗乙型肝炎表面抗原抗體也在審批之中。

至今為止，大多數(shù)病毒性疾病無特異性治療藥物。狂犬病的暴露后治療一直是世界性難題，對(duì)于嚴(yán)重暴露者(III)而言，世界衛(wèi)生組織建議同時(shí)用疫苗和狂犬病毒免疫球蛋白(Rabies?Immune?Globulin，RIG)進(jìn)行主動(dòng)和被動(dòng)免疫治療，目前可以選用的抗血清有馬抗狂犬病毒免疫球蛋白(ERIG)和人血來源的抗狂犬病毒免疫球蛋白(HRIG)。但由于ERIG在注入人體后有較強(qiáng)的副反應(yīng)，所以美國(guó)免疫學(xué)會(huì)建議在HRIG和ERIG中優(yōu)先選用HRIG進(jìn)行治療，但由于HRIG來源少，價(jià)格高，而且血制品中不僅非特異性雜蛋白多，特異性抗體含量很低，而且最大的問題是血源制品潛在的未能檢出的病原污染問題，從長(zhǎng)遠(yuǎn)利益考慮應(yīng)當(dāng)摒棄。因此以人源基因工程產(chǎn)品替代血制品已成為國(guó)內(nèi)外研究的一大方向，并正在逐步走向成功。用純鼠源單克隆抗體預(yù)防和治療病毒性疾病在國(guó)際上尚無任何批準(zhǔn)的先例，鼠源抗體人用最大的不利之處為異源蛋白，在人體內(nèi)易引起遺傳免疫排斥而使抗體失效并引起免疫性疾病。因此，特異性抗病毒人源中和性抗體是病毒性疾病預(yù)防和治療的最有前景的生物制品之一。人源抗病毒基因工程抗體的研究除已成功的抗RSV抗體外，通過噬菌體表面呈現(xiàn)系統(tǒng)，基因工程抗體庫技術(shù)和分子生物學(xué)手段的聯(lián)合運(yùn)用，這一領(lǐng)域的研究已取得重大進(jìn)展目前已研制成功的人源抗病毒全抗體有抗以下病毒的抗體：呼吸道合胞病毒，愛滋病毒(HIV)，乙肝病毒，單純皰疹病毒(HSV)，漢坦病毒等以及尚未發(fā)表的本所已研制成功的抗甲型肝炎病毒，狂犬病毒抗體等。人源抗狂犬病毒基因工程抗體制劑的研制成功，將為國(guó)內(nèi)外首創(chuàng)，有可能獲一類新藥證書。

本發(fā)明的目的是通過基因工程手段和噬菌體表面表達(dá)技術(shù)結(jié)合運(yùn)用，直接從人抗體基因庫中篩選出中和性抗狂犬病毒的基因工程單克隆抗體，獲得其抗體基因，為將來可能的臨床抗病毒預(yù)防和治療提供可行性的特異性抗體藥物。

本發(fā)明陳述的人源抗狂犬病毒中和性基因工程抗體包括：

1、人源抗狂犬病毒中和性基因工程抗體RVG10，包括Fab抗體和IgG全抗體基因、基因產(chǎn)物及其應(yīng)用。其主要特征在于此重組抗體是由存在于抗體輕鏈和重鏈基因可變區(qū)中的高變區(qū)(CDRs)特異性基因序列決定的并在原核和真核細(xì)胞中獲得有效表達(dá)的特異性結(jié)合狂犬病毒的功能性中和抗體。

2、人源抗狂犬病毒中和性基因工程抗體RVG10，其主要特征在于：抗體蛋白功能由存在于抗體基因輕鏈和重鏈可變區(qū)的決定族互補(bǔ)區(qū)域CDR1、CDR2和CDR3中特異性核苷酸序列決定的，其相應(yīng)的氨基酸序列構(gòu)成了抗體的特異性抗原結(jié)合區(qū)域，如圖9，是人源抗狂犬病毒中和性基因工程抗體可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列。