[發明專利]一種端粒酶活性檢測方法

無效

• 申請號: 00127583.6
• 申請日: 2000-11-28
• 公開（公告）號: CN1298951A
• 公開（公告）日: 2001-06-13
• 發明（設計）人: 陳燃;毛裕民
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12Q1/25
• 分類號: C12Q1/25;C12Q1/68
• 代理公司: 復旦大學專利事務所
• 代理人: 陸飛

1．一種端粒酶活性檢測方法，其特征在于在一定的反應體系和反應條件下，利用端粒酶活性，限定端粒酶引物延長，以端粒酶引物延長鏈作引導中間復制的引物，對一預定的、不能被端粒酶引物擴增的DNA片段-TESL進行復制，把端粒酶引物的完整序列引入到TESL子鏈的5’端，然后以端粒酶引物作為擴增引物，以TESL子鏈作擴增模板，進行PCR擴增，得到為一條較長的、能反映端粒酶活性水平的特異DNA片段，從而能方便地、準確地分析端粒酶活性。

2．根據權利要求1所述的端粒酶活性檢測方法，其特征在于所述的TESL：TESL的5’端的核苷酸組成依次為：端粒酶引物除去的3’末端的2個核苷酸外的全部序列的核苷酸+2個獨有核苷酸+3個端粒重復序列單元；TESL可以通過以SLP：5’-AATCCGTCGATAAGATCCGGTTAGGGTTAGGGTTAGTACT-3’為單引物，以質粒pUC118?DNA為模板，進行PCR擴增，切膠回收而獲得。

3．根據權利要求1所述的端粒酶活性檢測方法，其特征在于反應體系為：

Tris-HCl:pH8.2～9.1,20～50mmol/L;KCl:50～80mmol/L;MgCl₂:1.0～2.0mmol/L;Tween20:0.01％～0.1％;EGTA:0.5～2.0mmol/L;BSA:0.05～0.2mg/ml;DTT:0.5～2.0mmol/L;dNTP:0.05～0.2mmol/L;RNasin0.01～0.05U/μl;TESL:0.01～0.05μg/μl；端粒酶引物：3.0～8.0μmol/L;Taq酶:0.05～0.1U/μL;細胞或組織裂解液總蛋白濃度：1.0～6.0μg/μl。

4．根據權利要求1所述的端粒酶活性檢測方法，其特征在于反應程序為：

在35℃～37℃下，保溫10s～4min后；進行下面的循環反應：先在92℃～95℃溫度條件下，保溫10s～2min，然后在55℃～60℃，保溫10s～2min，再在68℃～74℃下，保溫30s～2min，如此反復進行28～35個循環；最后在68℃～74℃保溫2～7min。