[發明專利]以具有催化活性的核酸為基礎的診斷方法

無效

• 申請號: 00122574.X
• 申請日: 2000-06-03
• 公開（公告）號: CN1327070A
• 公開（公告）日: 2001-12-19
• 發明（設計）人: A·V·托德;C·J·菲里;M·J·凱恩斯
• 申請（專利權）人: 莊臣及莊臣研究股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/48
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 溫宏艷

1、測定受試者是否患有其特征在于存在已知核酸突變的疾病的方法，它包括步驟：

(a)從受試者分離核酸分子樣品；

(b)(i)擴增在分離的樣品中存在的核酸片段，該片段已知含有在患有該疾病的受試者中存在的突變，和(ii)在合適的條件下，將所得的擴增片段與催化性核酸分子接觸，其中該催化性核酸分子特異性地識別并裂解(1)在具有已知突變的核酸片段中或(2)在相應的野生型核酸片段中，但不是同時在兩者中存在的靶序列，前提是步驟(ii)可在步驟(i)之后或同時進行；和

(c)測定步驟(b)(ii)中的催化性核酸分子是否裂解擴增的片段，以確定受試者是否患有該疾病。

2、測定受試者是否患有其特征在于存在多種已知核酸突變的疾病的方法，它包括步驟：

(a)從受試者分離核酸分子樣品；

(b)(i)擴增在分離的樣品中存在的核酸片段，該片段已知含有在患有該疾病的受試者中存在的多種突變，和(ii)在合適的條件下，將所得的擴增片段與多種催化性核酸分子接觸，其中各催化性核酸分子特異性地識別并裂解(1)在具有已知突變的核酸片段中或(2)在相應的野生型核酸片段中，但不是同時在兩者中存在的靶序列，前提是步驟(ii)可在步驟(i)之后或同時進行；和

(c)測定步驟(b)(ii)中的各催化性核酸分子是否裂解擴增的片段，以確定受試者是否患有該疾病。

3、測定受試者是否患有其特征在于存在多種已知核酸突變的疾病的方法，它包括步驟：

(a)從受試者分離核酸分子樣品；

(b)(i)擴增在分離的樣品中存在的核酸片段，這些片段已知共同含有在患有該疾病的受試者中存在的多種突變，和(ii)在合適的條件下，將所得的擴增片段與多種催化性核酸分子接觸，其中各催化性核酸分子特異性地識別并裂解(1)在具有一種已知突變的一種核酸片段中或(2)在相應的野生型核酸片段中，但不是同時在兩者中存在的靶序列，前提是步驟(ii)可在步驟(i)之后或同時進行；和

(c)測定步驟(b)(ii)中的各催化性核酸分子是否裂解含有其各自靶序列的擴增片段，以確定受試者是否患有該疾病。

4、權利要求1，2或3的方法，其中受試者是人類。

5、權利要求1，2或3的方法，其中疾病選自癌癥，AIDS和囊性纖維化。

6、權利要求5的方法，其中該疾病是癌癥。

7、權利要求1，2或3的方法，其中擴增的核酸片段是RNA，且催化性核酸分子選自DNA和RNA。

8、權利要求1，2或3的方法，其中擴增的核酸片段是DNA，催化性核酸分子是RNA或DNA。

9、權利要求1，2或3的方法，其中(a)使用聚合酶鏈反應進行擴增；(b)催化性核酸分子是10-23DNAzyme；和(c)聚合酶鏈反應采用適于起動該片段擴增的DNA引物，該引物含有至少一個嘌呤核糖核苷酸殘基，它用作被10-23DNAzyme識別和裂解的擴增片段內的5′側位點。

10、權利要求9的方法，其中擴增片段被DNAzyme反式識別和裂解。

11、權利要求9的方法，其中(a)聚合物鏈反應采用一種適于起動該片段擴增的第二DNA引物，該第二引物包含編碼10-23?DNAzyme的酶基因，以便擴增時，所得的擴增的核酸分子包含10-23?DNAzyme；和(b)擴增的核酸片段被DNAzyme順式識別和裂解。

12、用于實施權利要求1，2或3的方法的試劑盒，包含(a)一種催化性核酸分子，它特異性地識別和裂解(i)在具有已知是一種疾病的特征的突變的核酸片段中或(ii)在相應的野生型核酸片段中，但不是同時在兩者中存在的靶序列，和(b)一種核酸試劑，它適用于擴增含有靶序列的核酸片段。

13、用于實施權利要求9的方法的試劑盒，包含(a)10-23?DNAzyme，它特異性地識別和裂解(i)在具有已知是一種疾病特征的突變的核酸片段中或(ii)在相應的野生型核酸片段中，但不是同時在兩者中存在的靶序列，和(b)適于在聚合酶鏈式反應條件下起動該片段擴增的DNA引物，該引物含有至少一個嘌呤核糖核苷酸殘基，它用作被10-23?DNAzyme識別和裂解的擴增片段內的5′側位點。

14、用于實施權利要求11的方法的試劑盒，包括：

(a)第一DNA引物，它包含編碼10-23?DNAzyme的酶基因，該10-23DNAzyme特異性地識別和裂解(i)在已知是一種疾病特征的突變的核酸片段中或(ii)在相應的野生型核酸片段中，但不是同時在兩者中存在的靶序列，該第一引物適于在聚合酶鏈式反應條件下起動該片段的擴增；和

(b)一種第二DNA引物，它適于在聚合酶鏈式反應條件下起動該片段的擴增，該第二引物含有至少一個嘌呤核糖核苷酸殘基，它用作被10-23?DNAzyme識別和裂解的擴增片段內的5′側位點，

以便在擴增時，(i)所得的擴增的核酸分子包含10-23?DNAzyme，和(ii)擴增的核酸片段被DNAzyme順式識別和裂解。