[發明專利]堿性海藻多糖裂解酶的發酵生產方法和生產該酶的微生物

無效

• 申請號: 00121106.4
• 申請日: 2000-07-26
• 公開（公告）號: CN1335393A
• 公開（公告）日: 2002-02-13
• 發明（設計）人: 馬延和;薛燕芬;周培瑾;劉潁;張志鋼;劉洪燦
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/88;//;C12R101)
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 胡交宇

本發明涉及一種新的微生物，和利用該微生物發酵生產酶的方法。

海藻多糖裂解酶或藻酸鹽裂解酶(Alginate?lyase.EC4.2.2.3.)，通過β-消除機制將海藻多糖降解為不飽和糖醛酸寡聚物-海藻酸寡糖(alginicacid?oilgosaccharides)和不飽和糖醛酸單體(uronic?acid)，根據酶對底物的作用，該酶分為兩種類型即polyM裂解酶及polyG裂解酶。

自90年代以來，海藻酸裂解酶在生物工程產品研發中的應用價值引起關注，它不僅可開發新生理活性物質，更重要的是開拓了一個新的工業應用領域。除了直接作為藥品酶應用于治療由致病菌銅綠假單胞菌引起的肺炎外，海藻多糖裂解酶應用的重要方向是酶法生產海藻寡糖，為新藥、新功能食品的開發提供了新手段。特別是被稱為寡糖素(oligosaccharins)的酶解產物——海藻寡糖的生理功能不斷被揭示，引起了人們更大的興趣。海藻寡糖的生理功能包括促進植物生長、刺激雙歧桿菌的增殖、抑制腫瘤、降低血壓、活化人表皮角質細胞等。1997年英國人又發現海藻寡糖素可使青霉素G產量增加50-150％(Ariyo?B.T.et?al.，Biotechnol.Bioeng.53∶17-20，1997)。

已經對海藻多糖裂解酶進行了大量研究，包括了海洋微生物及陸生微生物產生的該酶，涉及該酶的產生、純化、基因分析等各方面。主要參考文獻包括Marcello，A.et?al.：FEMS?Microbiol.Lett.；136(1)：39-44，1996；Aasen?I.M.et?al，37：55-60，1992；Ostgarol?K.et?al.：EnzymeMicrobiol.Technol.1993，15：756-763；Kinoshita，S.et?al.：J.Ferment.Bioeng.72：74-78，1991；Murata，K.et?al.：Comments?Agric.&?FoodChemistry，3(2)：87-110，1994；Sutherland，Ian?W.：Polysaccharide?lyases，FEMS?Microbiology?Reviews，16：323-347，1995；Sawabe，T.et?al.：Carbohydr.Res.；304(1)：69-76，1997；Shimokawa?T.et?al.：Biosci.Biotech.Biochem.，61(4)：636-640，1997；Malissard?M.et?al.：FEMS?Microbiol.Lett，126(2)：105-111，1995；Dyrset?N.et?al.：Appl.Microbiol.Biotechnol.41：523-530，1994；Nakagawa，A.et?al.：J.Appl.Microbiol.；84(3)：328-335，1998；Ertesvag，H.et?al.：J.Bacteriol.，180(15)：3779-3784，1998；Baron，A.J.et?al.：Gene，143(1)：61-66，1994；Brown，B.J.et?al.：Appl.Environ.Microbiol.57(6)：1870-1872，1991；Hicks，S.J.et?al.：Enzyme?Microbiol.Technol.，19(1)：68-73，1996。

已經作出了一些努力，試圖將海藻多糖裂解酶應用于海藻寡糖的生產，如JP63039581A2，JP63214192A2，US05516666，US04958016，EP00979301A1等專利，所述裂解酶來自Altermonas?sp.，Flavobacterium?sp.，Bacillus?sp.，Psudomonas?sp.等，而且也有開發特性酶的嘗試，如US05139945，WO09002794A1，AU04335189A1等報道的來自Bacillussteraothermophilus的高溫酶，但目前這些酶在酶活力、穩定性、半衰期等方面尚無法滿足應用于寡糖生產的實際需要，現有的海藻多糖裂解酶應用于海藻寡糖生產主要存在兩個問題，即酶活力低及活性復雜。因此實際應用的酶尚非常缺乏。

本發明的目的在于提供一種新的堿性海藻多糖裂解酶的生產菌株及堿性海藻多糖裂解酶的大量生產方法。