[發明專利]高純度高活性藻藍蛋白的分離純化方法

無效

• 申請號: 00117512.2
• 申請日: 2000-10-02
• 公開（公告）號: CN1291616A
• 公開（公告）日: 2001-04-18
• 發明（設計）人: 錢凱先;李江平;曾文輝;丁鳴
• 申請（專利權）人: 廣東梅縣梅雁藍藻有限公司
• 主分類號: C07K14/405
• 分類號: C07K14/405;C07K1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、一種高純度高活性藻藍蛋白的分離純化方法，其特征在于：

(1)新鮮的鈍頂螺旋藻藻泥，加入0．001～0．005M，PH=7的磷酸緩沖液，凍融1～2次后，置于冰浴中超聲破碎細胞；

(2)在4～10℃，以9000～11000轉／秒離心50～70分鐘，棄沉淀；

(3)取上清，加入30～60％飽和度硫酸銨在4～10℃，避光靜置過夜，在4～10℃，以13000～18000轉／秒離心20～40分鐘，取沉淀；

(4)用0．01～0．03M，PH=7的磷酸緩沖液溶解沉淀，在4～10℃，避光靜置，以0．01～0．03M，PH=7磷酸緩沖液透析，分子截留量12000Da；

(5)經快速濃縮后，上SephadexG200層析柱，用0．01～0．03M，PH=7磷酸緩沖液洗脫，收集峰值組分，上DEAE-SephadexA25柱，用0．005～0．007M，PH=7的磷酸緩沖液和0．2～0．4M，PH=7的氯化鈉洗脫，收集峰值組分，上ScphadcxG200柱，用0．01～0．03M，PH=7的磷酸緩沖液洗脫，整個柱層析在8～10℃，避光條件下進行；

(6)藻藍蛋白立即冰凍干燥，所得干粉在4～10℃，避光保存。

2、依權利要求1所述的藻藍蛋白的分離純化方法，其特征在于藻藍蛋白純度與活性指標A620nm／A280nm≥4；

3、依權利要求1所述的藻藍蛋白的分離純化方法，其特征在于藻藍蛋白熒光激發峰分別位于590nm和635nm；

4、依權利要求1所述的藻藍蛋白的分離純化方法，其特征在于藻藍蛋白熒光發射峰位于650nm。