[發明專利]一種人脫氫酶亞基蛋白異構體及其編碼序列

無效

• 申請號: 00116224.1
• 申請日: 2000-05-30
• 公開（公告）號: CN1278001A
• 公開（公告）日: 2000-12-27
• 發明（設計）人: 許志剛;肖華勝;康波愈;宋懷東;陳竺;韓澤廣
• 申請（專利權）人: 國家人類基因組南方研究中心
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07K14/435;C07K16/18;C07H21/00;C12Q1/68
• 代理公司: 復旦大學專利事務所
• 代理人: 陸飛

本發明涉及分子生物學、酶學、生理學以及基因工程等領域。具體地，本發明涉及一種在人類樹突狀細胞中表達的hNDS4-iso蛋白及其核酸序列。本發明還涉及該蛋白和核酸序列的制備方法和用途。

人類的線粒體DNA序列已經被完整測序，研究發現線粒體DNA包含了多個與呼吸鏈專有基因，其中包括NADH脫氫酶亞基4(NADH?dehydrogenase?subunit?4，NDS4)。(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.92(2)，532-536，1995)。呼吸鏈也稱線粒體電子轉運鏈(mitochondrial?electron?transport?chain，mtETC)，由四個大的酶復合物組成。復合物I即NADH：ubiquinone氧化還原酶復合物，是最大的一個，大約由41個亞基組成。(Hum?Mol?Genet?1998；7(10)：1573-9)。呼吸鏈通過電子轉運分解化合物為生物體提供能量。呼吸鏈上的基因突變、缺失等往往導致線粒體肌病等等代謝病的發生。

本發明中，我們在人類樹突狀細胞中克隆到人hNDS4基因的同源基因hNDS4-iso。

在本發明被公布之前，尚未有任何公開或報道過本專利申請中提及的人類hNDS4-iso蛋白序列及其核酸序列。

本發明的第一目的就是提供一種新的人基因hNDS4-iso(Genbank?AccessionNo.AF253979)，該基因是一個人hNDS4-iso蛋白基因。

本發明的第二目的是提供一種新的人蛋白hNDS4-iso。

本發明的第三目的是提供一種利用重組技術生產上述的新的人hNDS4-iso蛋白和核酸序列的方法。

本發明還提供了這種人hNDS4-iso蛋白多肽和編碼序列的應用。

在本發明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，該分子包括：編碼具有人hNDS4-iso蛋白質活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第628-1077位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第628-1077位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼具有SEQ?ID?NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第628-1077位的核苷酸序列。

在本發明的另一方面，提供了一種分離出的人hNDS4-iso蛋白質多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO.7序列的多肽。

在本發明的另一方面，還提供了一種載體，它包含上述的DNA分子。

在本發明的另一方面，還提供了一種用上述載體轉化的宿主細胞。在一個實例中該宿主細胞是大腸桿菌；在另一實例中，該宿主細胞是真核細胞。

在本發明的另一方面，還提供了一種產生具有人hNDS4-iso蛋白質活性的多肽的方法，其步驟如下：

(1)將編碼具有人hNDS4-iso蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地連于表達調控序列，形成人hNDS4-iso蛋白表達載體，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第628-1077位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)將步驟(1)中的表達載體轉入宿主細胞，形成人hNDS4-iso蛋白的重組細胞；

(3)在適合表達人hNDS4-iso蛋白多肽的條件下，培養步驟(2)中的重組細胞；

(4)分離出具有人hNDS4-iso蛋白活性的多肽。

較佳地，在該方法中使用的核酸序列具有SEQ?ID?NO.6中第628-1077位的序列。

本發明還提供了與hNDS4-iso蛋白多肽特異性結合的抗體。

在本發明中，“分離的”、“純化的”或“基本純的”DNA是指，該DNA或片段已從天然狀態下位于其兩側的序列中分離出來，還指該DNA或片段已經與天然狀態下伴隨核酸的組份分開，而且已經與在細胞中伴隨其的蛋白質分開。