[發明專利]一種新的多肽——RasGTP酶激活蛋白9.68和編碼這種多肽的多核苷酸

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• 申請號: 00116201.2
• 申請日: 2000-05-26
• 公開（公告）號: CN1325859A
• 公開（公告）日: 2001-12-12
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--Ras?GTP酶激活蛋白9.68，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

人類的基因中有一些調控正常細胞的生長。Ras基因是其中的一個亞群，至少包括三個成員，N-ras,H-ras，以及K-ras2。Ras的變異形式，被稱為抑癌基因，它被認為是癌癥的病原體。Ras的正常細胞基因及抑癌基因都編碼化學相關的蛋白，總稱為ras?p21蛋白。無論是正常的ras?p21與抑癌基因ras?p21蛋白，都與核苷酸，GTP及GDP結合，并把GTP緩慢水解為GDP。這種內在的GTP酶活性由細胞因子GAP刺激，其全稱為GTP酶激活蛋白，但它對抑癌基因變異相關的GTP酶活性不起作用。GAP是一種胞質蛋白，可從胞質轉入質膜與p21相互作用。由于它是活性ras的GTP結合形式，因而這些蛋白被稱為ras的負調節物。

GAP家族成員都是分子量較大的蛋白(從765個殘基至3079個殘基)，但相同的保守序列是一個有限的區域(約有250個殘基)，被稱為是“催化域”或rasGAP域。該區域中最為保守的區域是一段含有15個殘基的基序，它是該蛋白家族的特征序列：[GSN]-x-[LIVMF]-[FY]-[LIVMFY]-R-[LIVMFY](2)-[GACN]-P-[AV]-[LIV](2)-[SGAN]-P。

活性ras蛋白與細胞增殖直接相關。Ras抑癌基因與各種腫瘤生長有關，并涉及10-40％最為常見的人類癌癥，例如膀胱癌，結腸癌，腎癌，肝癌，肺癌，卵巢癌，胰腺癌以及胃癌。該基因還與淋巴及骨髓造血腫瘤，間充質起點瘤相關。本發明包括上述肽段的多肽，該多肽的拮抗劑，抑制劑以及激動劑可用于診斷，預防及治療癌癥，尤其是探測正常或抑癌基因ras?p21的過度表達并治療由ras抑癌基因引起的癌癥。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與Ras?GTP酶激活蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為Ras?GTP酶激活蛋白9.68。

由于如上所述Ras?GTP酶激活蛋白9.68蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的Ras?GTP酶激活蛋白9.68蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新Ras?GTP酶激活蛋白9.68蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--Ras?GTP酶激活蛋白9.68以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼Ras?GTP酶激活蛋白9.68的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼Ras?GTP酶激活蛋白9.68的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產Ras?GTP酶激活蛋白9.68的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--Ras?GTP酶激活蛋白9.68的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--Ras?GTP酶激活蛋白9.68的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與Ras?GTP酶激活蛋白9.68異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。