[發(fā)明專利]識別對蝦白斑桿狀病毒單鏈抗體的制備方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 00114500.2 | 申請日： | 2000-04-19 |
| 公開（公告）號： | CN1318564A | 公開（公告）日： | 2001-10-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 戴和平;高宏;趙新顏;戴玲芬;張憲孔 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院水生生物研究所 |
| 主分類號： | C07K16/08 | 分類號： | C07K16/08 |
| 代理公司： | 武漢科宏專利事務(wù)所 | 代理人： | 王敏鋒 |
| 地址： | 430072*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 識別 對蝦 白斑 桿狀病毒 抗體 制備 方法 | ||
1、一種識別對蝦白斑桿狀病毒單鏈抗體的制備方法，其特征是，該方法包括如下步驟：
(1)采用蔗糖密度梯度超速離心法，用電鏡檢測，從感病斑節(jié)對蝦的血淋巴液中分離純化白斑桿狀病毒；
(2)用蛋白量為20～150μg純化的完整對蝦白斑桿狀病毒粒子注射小鼠，用Titremax佐劑或福氏佐劑或氫氧化鋁等常用佐劑，經(jīng)17～26天進(jìn)行二次或三次免疫，再經(jīng)3～5天用酶聯(lián)免疫印跡法和酶聯(lián)免疫吸附法測定抗體效價(jià)，取抗體效價(jià)最高的小鼠脾臟，從中提取mRNA；
(3)將此mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再用對應(yīng)于重鏈和輕鏈抗體可變部位DNA的引物通過PCR技術(shù)將抗體的重鏈和輕鏈的可變片段的DNA擴(kuò)增；
(4)用一編碼可彎曲小肽的DNA小片段將重鏈和輕鏈DNA片段連接起來組成單鏈抗體DNA，再用對應(yīng)診斷單鏈抗體DNA的引物用PCR技術(shù)將整個(gè)片段擴(kuò)增；
(5)將單鏈抗體DNA片段兩端的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)(SfiⅠ和NotⅠ)酶切，再與具同樣酶切位點(diǎn)的噬菌體表達(dá)載體連接，電轉(zhuǎn)移至大腸桿菌中，可獲得較高效價(jià)的噬菌體抗體cDNA文庫；
(6)用吸附在朔料管壁上的對蝦白斑桿狀病毒對上述噬菌體抗體文庫進(jìn)行1～4次淘選，用酶聯(lián)免疫吸附法篩選可得到抗原結(jié)合專一性的陽性克隆，該陽性克隆分泌的單鏈抗體可專一性識別對蝦白斑桿狀病毒。
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