[發明專利]固定化氨基酰化水解酶拆分外消旋氨基酸生產左旋氨基酸的方法

無效

• 申請號: 00113235.0
• 申請日: 2000-01-18
• 公開（公告）號: CN1306092A
• 公開（公告）日: 2001-08-01
• 發明（設計）人: 覃業亞
• 申請（專利權）人: 覃業亞
• 主分類號: C12P13/04
• 分類號: C12P13/04
• 代理公司: 湖南省常德市專利事務所
• 代理人: 唐治芳

1、一種固定化氨基酰化水解酶拆分外消旋氨基酸的方法，其特征是：

(1)弱酸性陰離子交換樹脂經平衡后，裝柱，將氨基酰化水解酶(市售品)制成1000～1500μ/ml水溶酶在42～45℃以0.01～0.05mL/min·g載體的流速勻速通過載體柱，進行酶的固定化，當固定化酶活力達到500～700μ/g載體時，固酶完畢。

(2)將D,L-N-乙酰基氨基酸配成5～10％(w/w)水溶液，用Na₂CO₃或NH₃·H₂O調整溶液PH為6.5～10.0。

(3)將D,L-N-乙酰基氨基酸水溶液在42～45℃保溫狀態下，以0.01～0.05ml/min·g載體的流速勻速通過酶柱，進行拆分。

(4)拆分液在60～70℃真空減壓濃縮至原體積的1/2～1/4冷卻至0～5℃，攪拌結晶，分離后經乙醇或甲醇洗滌，干燥得左旋氨基酸。

(5)調整結晶母液PH1.0～5.0，攪拌，結晶，分離，干燥，得D-N-乙酰基氨基酸。

(6)將D-N-乙酰基氨基酸制得D,L-N-乙酰基氨基酸。

2、如權利要求1所速，制備固定化氨基酰化水解酶的方法，其特征是采用弱酸性陰離子交換樹脂作為固酶載體。

3、如權利要求1所述，制備固定化氨基酰化水解酶的方法，其特征是使用氨基酰化水解酶，并配成活力為1000～1500μ/mL酶液，用Na₂CO₃或NH₃·H₂O調整PH6.5～10.0，在42～45℃，以0.01～0.05mL/min.g載體勻速流過酶柱。

4、如權利要求1所述，制備固定化氨基酰化水解酶的方法，其特征是當酶被載體固定化后，用0.1～0.2M醋酸鈉溶液進行洗滌。

5、如權利要求1所述，其特征是底物濃度為5～15％(w/w)，并用Na₂CO₃或NH₄OH調整PH6.5～10.0。

6、如權利要求1所述，其特征是拆分溫度控制在42～45℃，底物按0.01～0.05mL/min·g載體勻速通過固定化氨基酰化水解酶柱。

7、如權利要求1所速，其特征是拆分液在真空狀態下，60～70℃進行減壓濃縮，濃縮比控制在2～4∶1。????

8、如權利要求1所述的D,L-N-乙酰基氨基酸的制取步驟，特征在于：

取一重量分D,L-氨基酸，置于搪玻璃反應釜中，加入1～5份水，在攪拌狀態下，滴加其理論用量1.5～2.0倍的醋酐，控制合成溫度為25～50℃，滴加完畢后，在25～50℃保溫攪拌5～10小時，置于搪玻璃結晶釜中，冷卻至0～5℃，加入結晶促進劑，攪拌結晶≥5小時，離心分離，得D,L-N-乙酰基氨基酸。

9、權利要求1所述的D-N-乙酰基氨基酸的回收方法，特征在于：

(1)將離心分離出L-氨基酸的結晶母液投入搪玻璃反應釜中，用10～20％濃度硫酸或25～30％濃度鹽酸調整PH1.5～5，升濕至45±5℃。

(2)將上速溶液置于搪玻璃結晶釜中，冷卻靜置結晶，結晶溫度0～5℃，結晶時間≥5小時。

(3)用離心機離心分離，40～100℃干燥，得D-N-乙酰基氨基酸。

10、權利要求1所述的D-N-乙酰基氨基酸外消旋，其特征是接如下步驟進行的：

(1)將D-N-乙酰基氨基酸在40～100℃條件下常壓干燥其水份≤3％。

(2)將一重量份D-N-乙酰基氨基酸用1.5～3重量份水溶解，加入其理論用量1～3倍乙酸酐，升溫至60～70℃，攪拌3～5小時，然后冷卻至0～5℃，結晶≥5小時，離心脫水后，在40～100℃，干燥，得D,L-N-乙酰基氨基酸。