[發(fā)明專利]發(fā)酵制備L－氨基酸的方法及編碼accDA基因的核苷酸序列

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00109310.X
• 申請(qǐng)日: 2000-05-19
• 公開（公告）號(hào): CN1275620A
• 公開（公告）日: 2000-12-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 伊沃內(nèi)·蒂爾格;洛塔爾·埃格林;伯恩哈德·艾克曼斯;赫爾曼·扎姆;貝蒂娜·默克爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 德古薩－于爾斯股份公司;于利希研究中心有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/09
• 分類號(hào): C12N15/09;C12N15/10;C12N15/11;C07K14/34;C12P13/04;C12P13/08
• 代理公司: 永新專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

1、源自棒桿菌并能在棒狀微生物中復(fù)制并至少含有SEQ?IDNO.1所示編碼accDA基因的核苷酸序列的優(yōu)選地重組的DNA。

2、如權(quán)利要求1的能復(fù)制的DNA，其具有：

(i)SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列，

(ii)至少一個(gè)在遺傳密碼簡并區(qū)內(nèi)相應(yīng)于(i)序列的序列，或

(iii)至少一個(gè)與互補(bǔ)于(i)或(ii)序列的序列雜交的序列，且任選地

(iv)在(i)內(nèi)的中性有義突變。

3、衍生自如權(quán)利要求1或2的核苷酸序列的蛋白質(zhì)氨基酸序列，如SEQ?ID?NO.3所示。

4、通過導(dǎo)入一或多個(gè)如權(quán)利要求1或2的能復(fù)制的DNA而轉(zhuǎn)化的棒狀微生物，尤其是棒桿菌屬。

5、具有如圖1所示限制圖譜的穿梭載體pZ1accD，保藏在谷氨酸棒桿菌中，保藏號(hào)DSM?12785。

6、一種通過棒桿菌的發(fā)酵制備L-氨基酸，尤其L-賴氨酸的方法，其中所用細(xì)菌中，accDA基因或編碼其的核苷酸序列被擴(kuò)增，且尤其是過量表達(dá)的。

7、如權(quán)利要求6的方法，其中所用細(xì)菌中，所需L-氨基酸的生物合成途徑的其它基因被額外擴(kuò)增。

8、如權(quán)利要求6的方法，其中所用細(xì)菌中，降低所需L-氨基酸生成的代謝途徑至少被部分阻斷。

9、如權(quán)利要求6-8的方法，其中使用質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化的菌株，且此載體攜帶編碼accDA基因的核苷酸序列。

10、如權(quán)利要求9的方法，其中應(yīng)用的是用質(zhì)粒載體pZ1accDA轉(zhuǎn)化的細(xì)菌，該質(zhì)粒保藏在谷氨酸棒桿菌中，保藏號(hào)DSM?12785。

11、如前述一或多條權(quán)利要求的方法，其中應(yīng)用產(chǎn)生L-天冬氨酸，L-天冬酰胺，L-高絲氨酸，L-蘇氨酸，L-異亮氨酸和L-甲硫氨酸的棒桿菌。

12、如權(quán)利要求6-10的一或多條要求的方法，其中應(yīng)用產(chǎn)生L-賴氨酸的棒桿菌。

13、如權(quán)利要求6-11的一或多條要求的方法，其中除了accDA基因之外，accBC基因也是過量表達(dá)的。

14、如權(quán)利要求6的方法，其中編碼二氫-2，6-吡啶二羧酸合酶的dapA基因是同時(shí)過量表達(dá)的。

15、如權(quán)利要求6的方法，其中賦予S-(2-氨乙基)半胱氨酸抗性的DNA片段同時(shí)被擴(kuò)增。

16、如前述一或多條權(quán)利要求的經(jīng)發(fā)酵制備L-氨基酸的方法，其中進(jìn)行以下步驟：

a)發(fā)酵產(chǎn)生所需L-氨基酸的棒桿菌，其中至少accDA基因被擴(kuò)增，

b)在培養(yǎng)基中或在細(xì)菌的細(xì)胞中富集所需L-氨基酸，

c)分離所需氨基酸。