[發(fā)明專利]一種維生素D3樣正調(diào)控蛋白及編碼它的多核苷酸序列

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00106835.0
• 申請日: 2000-04-19
• 公開（公告）號: CN1318551A
• 公開（公告）日: 2001-10-24
• 發(fā)明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海生元基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 陳文平

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領域，具體地說，本發(fā)明公開了分離的維生素D3樣正調(diào)控蛋白(以下簡稱為VDUPLP)的多核苷酸序列及其編碼的多肽，以及制備這種多肽的方法。本發(fā)明也公開了將這種多肽用于相關疾病如惡性腫瘤、血液病、HIV感染和免疫性疾病和各類炎癥等的診斷、預防和/或治療的方法。本發(fā)明還公開了利用本發(fā)明多肽篩選其拮抗劑、激動劑、抑制物和制備針對本發(fā)明多肽的抗體的方法，也公開了利用本發(fā)明基因的多核苷酸序列和多肽及其拮抗劑、激動劑、抑制物和抗體的用途。

維生素D是生物體鈣代謝、磷代謝所必須物質(zhì)。它經(jīng)過光照及一系列反應在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚越Y(jié)構(gòu)1,25-二羥維生素D-3(1,25-(OH)₂D3)來發(fā)揮其功能。實驗發(fā)現(xiàn)1,25-(OH)₂D3在HL-60細胞分化時負調(diào)控c-myc而抑止生長，正調(diào)控維生素D3正調(diào)控蛋白1(VDUP1)，以及誘導c-fms沿單細胞/巨噬細胞途徑分化。(Kai-shun?Chen等人，1994，生物化學與生物物理學通報(Biochimica?biophysica?Acta),1219?26-32)

VDUP1從HL-60?cDNA文庫通過差相雜交篩選1,25-(OH)₂D3誘導克隆而獲得。序列分析顯示與一種腦內(nèi)表達的功能不明的人類基因(Genbank保藏號M78879)同源。氚-(1,25-(OH)₂D3)放射自顯影顯示腦內(nèi)有維生素D受體，(Stumpf,W.E.等人，1982，科學，215,1403-1405)，推想可能VDUP1來源于和M78879相同的基因以及在腦內(nèi)表達。

在HL-60細胞中，VDUP1轉(zhuǎn)錄顯著被1,25-(OH)₂D3激活，但不被另一個單細胞分化誘導子PMA所作用。VDUP1對1,25-(OH)₂D3是首級應答，蛋白合成抑制劑環(huán)己酰亞胺不妨礙1,25-(OH)₂D3對VDUP1的誘導，反而能提高VDUP1的mRNA水平，推測VDUP1?mRNA的降解是依賴翻譯的降解，或者是被一種不穩(wěn)定蛋白調(diào)控的降解，或者二者兼而有之。(Kai-shun?Chen等人，1994，生物化學與生物物理學通報，121926-32)。

由于如上所述VDUP1蛋白在調(diào)節(jié)細胞生長、分化等機體重要功能中起重要作用，為了進一步了解上述細胞生長發(fā)育的生理過程，需要了解和鑒定參與這些過程的VDUP1蛋白，特別是首先鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新VDUPLP蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白質(zhì)在細胞生長發(fā)育過程中的作用提供了基礎。這種蛋白質(zhì)可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎。

本發(fā)明的目的就是提供一種新的維生素D3樣正調(diào)控蛋白及編碼它的多核苷酸。本發(fā)明的多肽具有維生素D3樣正調(diào)控蛋白基因的特征結(jié)構(gòu)域，因而推斷本發(fā)明的維生素D3樣正調(diào)控蛋白是一種新的這類蛋白質(zhì)。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少80％相同性的多核苷酸。

特別地，所述多核苷酸序列選自：(a)具有SEQ?ID?NO:1中90-992位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-3639位的序列

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導或轉(zhuǎn)染的宿主細胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細胞和回收表達產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。

本發(fā)明還涉及一種能與本發(fā)明多肽特異性結(jié)合的抗體。

本發(fā)明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制該蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發(fā)明的多肽。本發(fā)明還涉及用該方法獲得的化合物。

本發(fā)明還涉及一種體外檢測與該維生素D3樣正調(diào)控蛋白異常表達相關的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本發(fā)明多肽的量或生物活性。

本發(fā)明也涉及一種藥物組合物，它含有本發(fā)明多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學上可接受的載體。