[發明專利]MCV分析中的稀釋劑以及確保其具有不隨時間變化的一致性的方法

無效

• 申請號: 00106392.8
• 申請日: 2000-06-02
• 公開（公告）號: CN1276526A
• 公開（公告）日: 2000-12-13
• 發明（設計）人: B·豪溫;內橋欣也;浜口行雄;R·馬斯特
• 申請（專利權）人: 希森美康株式會社
• 主分類號: G01N33/49
• 分類號: G01N33/49;G01N15/14
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 楊宏軍

本發明涉及分析血樣中的平均紅細胞容積(MCV)，特別是涉及一種用顆粒分析儀在進行MCV分析的過程中使用的試劑和方法。

現在，臨床檢查領域廣泛使用了自動血液分析儀。作為醫療診斷過程中對病人作檢查的裝置，它們被設計為可對血液成分進行快速分析。這些裝置能夠進行全部血球數(CBC)的多種分析，包括諸如紅血球(RBC)數、白血球(WBC)數、白血球分類、血紅蛋白濃度(Hb)、血細胞比容(Ht)和血小板數(PLT)這些項目。

MCV是從這些細胞分析值中計算得到重要項目中的一項。MCV可以由血細胞比容被紅細胞數所除，就是Ht/RBC值而得到，血細胞比容就是一個單位容積的全血中紅血球的百分含量。那么MCV就是單個紅血球的平均容積，相應的其單位是fL、飛升、或10^-15L。

上述血液分析儀采用流式血細胞計數器。在流式血細胞計數器中，稀釋后的血液以高速通過一個非常細小的噴嘴導入流動槽，并且，噴嘴導出的液流被包覆液體(層流)的圓柱形流所包圍。通過使該層流變窄，可以由此將樣品流聚集至如下程度，即該樣品流基本上呈一個細胞接一個細胞的線性序列。從而這些樣品流中細胞的通過被該層流控制，通過采用激光照射液流，用光學方法檢測該細胞，以及通過測量電阻和電導率，用電學方法檢測該細胞。

為給上述的血液分析儀中使用的流式血細胞計數器分析制備全血樣品，樣品一般必須使用抗凝劑如EDTA鹽處理，并用生理等滲溶液稀釋。

作為用來稀釋整個血液的稀釋劑，一般有如下溶液例如生理鹽水、林格式溶液(Ringer’s?solution)、洛克式溶液(Lock’s?solution)和臺羅德式溶液(Tyrode’s?solution)。在前述血液分析器的分析過程中也可以使用上述稀釋劑。然而通常，每臺分析儀選用最佳稀釋劑。

在制備MCV分析的全血樣品過程中，目前技術上存在的主要問題是實際的MCV會隨血液采集后經歷的時間而改變。臨床診斷中MCV值是必要而又重要的，它應在血樣采集后立即獲得，也就是，該值應當與原始血液的MCV值相一致。

實踐中，作為CBC一部分的MCV值直到采集血樣72小時后才會被測量。而此時這樣的血樣再也不能產生適宜的MCV分析值了。血液采集后，樣品中的RBC膨脹，使得經過采集后的經歷時間所測得的MCV值漸漸大于原始RBC的平均容積。原始MCV才是診斷所需的真正測量。

日本專利公告8-33388(1996)，日本專利公告7-82010(1995)和日本專利申請公開8-122327(1996)公開了各種含有非離子型表面活性劑的水溶液。然而，不管這些溶液中的哪一種用作流式血細胞計數器的包覆液，都需要在流動腔內加入非離子型表面活性劑以消除氣泡。

另外，日本專利公告1-33780(1989)公開了一種稀釋劑，在其中加入一種非離子型表面活性劑以抵銷防腐劑對紅細胞的影響，最終目的是在所測的MCV中抑制由于防腐劑而產生的稀釋后的變化。然而，日本專利公告1-33780沒有公開在所測的MCV中抑制因為血樣采集后的經歷時間而產生的變化的方法。

如果能找到一種在血液采集72小時后測得的血細胞比容和紅細胞數與血樣原始值一致的方法，這將是本領域中的重要進步。

本發明使得采集后的血液經過一段時間后分析仍能產生一個與該樣品原始值非常一致的MCV值，也就是與采集后立刻測量的MCV值相一致。

根據本發明的試劑是一種血樣的水稀釋溶液，它包括在有限的濃度范圍內加入少量的預定表面活性劑。用合適的物質將該試劑的滲透壓調至預定范圍。

用于本發明的試劑是一種水溶液，它包括非離子型表面活性劑和用于將滲透壓(π)調至大約150-400mOsm/Kg的一種鹽或合適的物質。

該試劑優選的滲透壓(π)大約是230-350mOsm/Kg；特別優選的是大約260-320mOsm/Kg的滲透壓(π)。本發明實施例中的非離子型表面活性劑的例子可以是下面任何一個。

?????(1)

R-O(CH₂CH₂O)_nH

?????(2)

R-COO(CH₂CH₂O)_nH

??????(3)R-COO(CH₂CH₂O)_nCO-R