[發(fā)明專利]圈卷產(chǎn)色鏈霉菌變株及其培養(yǎng)方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00105881.9
• 申請(qǐng)日: 2000-04-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1269404A
• 公開(kāi)（公告）日: 2000-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 駱愛(ài)群;宋幼新;劉志恒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N15/01;C12N13/00;//;C12R1465)
• 代理公司: 北京三友專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 劉朝華

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，特指一種圈卷產(chǎn)色鏈霉菌變株及其培養(yǎng)方法和應(yīng)用。

圈卷產(chǎn)色鏈霉菌為中國(guó)科學(xué)院微生物研究所篩選培養(yǎng)出的放線菌，可用其產(chǎn)生新多氧霉素菌，該菌在放線菌分類上屬于鏈霉菌屬，命名為圈卷產(chǎn)色鏈霉菌種(Streptomyces?ansochromogenus)。其培養(yǎng)和發(fā)酵方法包括如下步驟：

1、斜面培養(yǎng)基：用高氏一號(hào)培養(yǎng)基或葡萄糖-天門冬素做培養(yǎng)基，裝斜面培養(yǎng)基于試管內(nèi)。

2、斜面培養(yǎng)：用從自然界土壤中分離出的鏈霉菌接種到斜面培養(yǎng)基后，在20-30℃條件下培養(yǎng)，便獲得該菌種的斜面培養(yǎng)物；

3、發(fā)酵培養(yǎng)液配制：用黃豆粉1.0-5.0％、淀粉0.8％-5.5％、NaCl?0.1-0.8％、酵母浸膏0.05-0.35％、碳酸鈣0.15-0.4％，與水混勻，分裝于三角瓶，高壓滅菌，121℃，30分鐘，制成發(fā)酵培養(yǎng)液；

4、培養(yǎng)圈卷產(chǎn)色鏈霉菌：將3-8ml的無(wú)菌生理鹽水加入培養(yǎng)好的斜面中，用接種環(huán)刮取斜面上已長(zhǎng)好的菌苔，制成菌懸液，取0.1-1.0ml菌懸液接入發(fā)酵培養(yǎng)液中，5瓶/批，在20-32℃的條件下?lián)u瓶培養(yǎng)30-75小時(shí)，搖瓶機(jī)的轉(zhuǎn)速為120-300轉(zhuǎn)/分，偏心距為15mm-30mm，培養(yǎng)出圈卷產(chǎn)色鏈霉菌。其主要缺陷在于產(chǎn)素能力較低，且產(chǎn)素的不穩(wěn)定性較高，同一批中，不同三角瓶的產(chǎn)素水平的差距在30-60％之間，不同批的平均產(chǎn)素水平偏差也在30％以上，故難以應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中。

本發(fā)明的目的在于提供一種圈卷產(chǎn)色鏈霉菌變株及其培養(yǎng)方法和應(yīng)用，通過(guò)物理或化學(xué)誘變處理孢子液來(lái)改變其產(chǎn)素不穩(wěn)定性，達(dá)到提高產(chǎn)素能力及培養(yǎng)高產(chǎn)穩(wěn)定的圈卷產(chǎn)色鏈霉菌變株的目的。

本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種圈卷產(chǎn)色鏈霉菌變株，通過(guò)化學(xué)誘變劑、紫外線照射、衛(wèi)星搭載和高能等離子輻射復(fù)合處理中的一種或兩種以上聯(lián)合處理孢子液，培養(yǎng)出的圈卷產(chǎn)色鏈霉素菌變株，保藏號(hào)為CGMCC?NO0446，分類命名為“圈卷產(chǎn)色鏈霉菌種Streptomyces?ansochromogenus”；

該化學(xué)誘變劑為N-甲基-N’-硝基-亞硝基胍，使用濃度為120微克-300微克，

該紫外線誘變處理為在紫外燈下照射30-300秒，避光進(jìn)行紫外線誘變處理；

該衛(wèi)星搭載和高能等離子輻射復(fù)合處理為先將孢子液置于安培管及微生物培養(yǎng)箱內(nèi)，在衛(wèi)星搭載艙內(nèi)隨衛(wèi)星搭載，再置于高能等離子發(fā)生器內(nèi)進(jìn)行輻射誘變處理5-90秒鐘。

一種圈卷產(chǎn)色鏈霉菌變株的培養(yǎng)方法，具體步驟如下：

(1)孢子液的制備：先將鏈霉菌的菌種接種到斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基為高氏一號(hào)或葡萄糖-天門冬素培養(yǎng)基，裝斜面培養(yǎng)基的試管規(guī)格內(nèi)徑為14-22mm，長(zhǎng)度為18-23mm，試管的蓋為棉塞或硅橡膠塞，培養(yǎng)溫度為20-32℃，時(shí)間5-35天，待菌苔生長(zhǎng)出后，加入5-12ml/支的無(wú)菌生理鹽水，將菌苔輕輕刮起，使菌苔表面的孢子盡可能地分散到鹽水中，用吸管將孢子液移至的三角瓶中；

(2)誘變處理：通過(guò)化學(xué)誘變劑、紫外線照射、衛(wèi)星搭載和高能等離子輻射復(fù)合處理中的一種或兩種以上聯(lián)合處理孢子液，培養(yǎng)出的、圈卷產(chǎn)色鏈霉素菌變株。

(3)分離誘變株：取處理后的菌液0.05-0.5ml/皿加到事先鋪好的平板，培養(yǎng)基為高氏一號(hào)或葡萄糖-天門冬素培養(yǎng)基，用玻璃棒制成的三角刮鏟涂平板，進(jìn)行培養(yǎng)，溫度為20-35℃，時(shí)間5-40天，培養(yǎng)出本發(fā)明的高產(chǎn)穩(wěn)定的圈卷產(chǎn)色鏈霉菌變株。

該化學(xué)誘變劑處理為在制備的孢子液中，加化學(xué)誘變劑N-甲基-N’-硝基-亞硝基胍，濃度為120微克-300微克，在溫度20-38℃條件下，上搖瓶機(jī)，轉(zhuǎn)速15-60轉(zhuǎn)/分，避光進(jìn)行化學(xué)誘變處理，時(shí)間為20分鐘至90分鐘。

該紫外線誘變處理為，將制備好的孢子液加到內(nèi)徑為4-10mm的雙碟中，加入量為3-15ml，在距離為250mm-600mm的紫外燈下，照射時(shí)間為30-200秒，處理前、后及處理過(guò)程中，均要求避免其他光線進(jìn)行紫外線誘變處理。

該衛(wèi)星搭載和高能等離子輻射復(fù)合處理為先將孢子液置于安培管及微生物培養(yǎng)箱內(nèi)，在衛(wèi)星搭載艙內(nèi)隨衛(wèi)星搭載10-20天，再置于高能等離子發(fā)生器內(nèi)進(jìn)行輻射誘變處理5-90秒鐘。

一種圈卷產(chǎn)色鏈霉菌變株的應(yīng)用，圈卷產(chǎn)色鏈霉菌變株應(yīng)用于工業(yè)化微生物發(fā)酶生產(chǎn)新多氧霉素及新多氧霉素衍生物的前體生產(chǎn)中。