[發(fā)明專利]在單端孢菌毒素缺陷的絲狀真菌突變細胞中生產(chǎn)異源多肽的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 99808112.4
• 申請日: 1999-05-20
• 公開（公告）號: CN1309711A
• 公開（公告）日: 2001-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: J·C·羅耶;L·M·克里斯琴森;G·A·甘貝塔;H·布魯?shù)?/a>;S·M·奧塔尼;W·T·約德
• 申請（專利權(quán)）人: 諾沃諾爾迪斯克生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/80
• 分類號: C12N15/80;C12P21/00;C12N9/88;C12N15/60;C12N1/15;C12N9/24;//;C12R177)
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務(wù)所
• 代理人: 黃革生

1．一種制備多肽的方法，包括：

(a)在有利于多肽產(chǎn)生的條件下培養(yǎng)親本絲狀真菌細胞的突變體，其中(ⅰ)該突變體包含編碼所述多肽的第一核酸序列和含有對至少一個參與產(chǎn)生單端孢菌毒素之基因的修飾的第二核酸序列，(ⅱ)培養(yǎng)在相同條件下時，該突變體產(chǎn)生的單端孢菌毒素少于親本絲狀真菌細胞；和

(b)從培養(yǎng)基中分離所述多肽。

2．權(quán)利要求1的方法，其中所述絲狀真菌細胞是支頂孢屬，曲霉屬，短梗霉屬，隱球酵母屬，線黑粉菌屬，鐮孢屬，赤霉屬，腐質(zhì)霉屬，Magnaporthe，毛霉屬，毀絲霉屬，漆斑菌屬，Neocallimastix，脈孢菌屬，擬青霉屬，青霉屬，Piromyces，皺褶菌屬，踝節(jié)菌屬，熱子囊菌屬，梭孢殼屬，Tolypocladium或者木霉屬菌株。

3．權(quán)利要求1的方法，其中所述絲狀真菌細胞是鐮孢屬菌株。

4．權(quán)利要求3的方法，其中所述鐮孢屬細胞是Fusariumvenenatum細胞。

5．權(quán)利要求4的方法，其中所述Fusarium?venenatum細胞是Fusarium?venenatum?ATCC20334。

6．權(quán)利要求4的方法，其中所述Fusarium?venenatum細胞是一種形態(tài)學突變體。

7．權(quán)利要求6的方法，其中所述Fusarium?venenatum細胞是Fusarium?venenatum?ATCC20334的形態(tài)學突變體。

8．權(quán)利要求1-7任何一項所述的方法，其中的基因選自tri3、tri4、tri5、tri6、tri11、tri12、tri101。

9．權(quán)利要求1-8任何一項所述的方法，其中的基因是tri5或trichodiene合成酶基因。

10．權(quán)利要求1-9任何一項所述的方法，其中的基因是tri3基因。

11．權(quán)利要求1-10任何一項所述的方法，其中的基因是tri4基因。

12．權(quán)利要求1-11任何一項所述的方法，其中的基因是tri6基因。

13．權(quán)利要求1-12任何一項所述的方法，其中的基因是tri11基因。

14．權(quán)利要求1-13任何一項所述的方法，其中的基因是tri12基因。

15．權(quán)利要求1-14任何一項所述的方法，其中的基因是tri101基因。

16．權(quán)利要求1-15任何一項所述的方法，其中的突變細胞培養(yǎng)在相同條件下時，比親本絲狀真菌細胞產(chǎn)生的單端孢菌毒素少至少大約25％。

17．權(quán)利要求1-16任何一項所述的方法，其中的突變細胞不產(chǎn)生單端孢菌毒素。

18．權(quán)利要求1-17任何一項所述的方法，其中的絲狀真菌細胞包含至少兩個拷貝的第一核酸序列。

19．權(quán)利要求1-18任何一項所述的方法，其中的異源多肽是一種激素、激素變體、酶、受體或其一部分、抗體或其一部分或者是一種報道蛋白。

20．權(quán)利要求19的方法，其中所述酶是氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、裂解酶、異構(gòu)酶或連接酶。

21．權(quán)利要求20的方法，其中所述酶是氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、過氧化氫酶、纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、角質(zhì)酶、環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶、脫氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、轉(zhuǎn)化酶、漆酶、脂酶、甘露糖苷酶、齒斑葡聚糖酶、氧化酶、果膠水解酶、過氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶或木聚糖酶。

22．權(quán)利要求1-21任何一項所述的方法，其中的突變細胞還包含1或多個第三核酸序列的1或多個修飾，這些修飾使所述1或多個第三核酸序列的表達減少或消除。