[發明專利]用于檢測單抗藥物和抗單抗藥物抗體的試劑及其應用

有效

• 申請號: 202010164159.2
• 申請日: 2020-03-11
• 公開（公告）號: CN111024958B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 肖智;李全;張建珍;焦守恕;何建偉;吳智廣;吳凡
• 申請（專利權）人: 同昕生物技術（北京）有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

本發明涉及血藥濃度檢測，具體涉及用于檢測單抗藥物和抗單抗藥物抗體的試劑及其應用。所述試劑包括解離液，所述解離液為pH2?3、8～10mM的甘氨酸緩沖液或醋酸?醋酸鈉緩沖液，其中含有體積分數為0.05%～0.1%的Tween?20、10～15μg/ml鼠IgG和/或10～15μg/ml人IgG。本發明的試劑可有效降低非特異性反應，解決現有酸解離試劑背景信號強、信噪比低的問題。

技術領域

本發明涉及血藥濃度檢測，具體涉及用于檢測單抗藥物和抗單抗藥物抗體的試劑及其應用。

背景技術

蛋白類藥物都屬于大分子藥物，其藥物成分和結構的異物性決定了這些藥物均具有免疫原性，由此人體會產生針對該藥物的ADA（抗藥物抗體，anti-Drug antibody）。ADA的產生除與藥物的免疫原性相關外，還與用藥劑量、治療頻率、藥物動力學個體差異等因素有關。多種因素影響大分子藥物的藥代動力學，如患者的身體體質、病理狀態、用藥史等，但ADA的產生是其中最重要的原因之一。ADA主要通過阻斷藥物與作用靶點的結合，直接影響藥物的治療效果。ADA可以通過增加藥物清除率和降低血藥濃度改變藥物的藥代動力學特征，導致臨床效果損失。因此，合理的監測藥物血藥濃度和抗藥物抗體對提高患者的治療效果和降低醫療成本有重要的指導意義。

在上世紀九十年代末，治療性抗TNF-α抗體被開發（如英夫利西單抗，Infliximab）。嵌合單克隆抗體，含有30％的鼠源和70％的人源（抗體的保守區域由人Fc組成）能夠激活效應細胞功能，并具有良好的特異性和親和性。人源化單克隆抗體，5％鼠源和95％人源，似乎有更好的耐受，但親和力較低一些。而全人源單克隆抗體（如阿達木單抗，adalimumab；戈利木單抗，golimumab）免疫源性會更小一些。除了這些單克隆抗體外，還有融合蛋白，如依那西普（Etanercept）、益賽普。這些藥物的性質導致它們具有免疫原性，并產生抗藥物抗體（ADA）。研究表明，無論藥物可變區的人源化水平高低均會產生ADA。這種免疫反應多樣性與藥物治療方案、藥物分子的免疫原性以及病人的敏感性相關。

阿達木單抗（修美樂）為全人源化抗體，由于其較高的活性和低免疫原性，在類風濕治療中發揮了十分重要的作用，是目前臨床主要的治療藥物。但是，在阿達木藥物和ADA測試中，有相當一部分藥物與ADA結合，需要將藥物抗體與藥物進行解離后進行測定。而現有的解離方式均為酸性解離方式，即樣本在酸性條件下，藥物結合型ADA與藥物解離，然后中和后測定ADA和藥物濃度。由于解離試劑的pH值、濃度（鹽離子強度），中和試劑的pH值、濃度（鹽離子強度）均會影響ADA的測定，過酸、過堿或高鹽的反應體系，會顯著降低反應體系的信噪比。此外，由于血液樣本在酸性條件下，蛋白的親水-疏水平衡被打破，酸解離后的樣本在ADA和藥物濃度測定中非特異性反應增強，背景信號會增加，試劑盒的信噪比變差。

發明內容

針對上述領域存在的不足，本發明提供用于單抗藥物和抗單抗藥物抗體檢測的試劑及檢測方法，可有效降低非特異性反應，解決現有酸解離試劑背景信號強、信噪比低的問題。

一方面，本發明提供用于檢測單抗藥物和抗單抗藥物抗體血藥濃度的試劑或試劑盒，包括解離液，其特征在于：所述解離液為pH2-3、8～10mM的甘氨酸緩沖液或醋酸-醋酸鈉緩沖液，其中含有體積分數為0.05%～0.1%的Tween-20、10～15μg/ml鼠IgG和/或10～15μg/ml人IgG。

在本發明的優選實施例中，所述試劑或試劑盒還包括中和液和/或抗體親水化處理液；所述中和液含有體積分數為10～15%的馬血清；所述抗體親水化處理液含有10～15mg/ml的活性酯PEG羥基和/或活性酯PEG羧基。

在本發明的優選實施例中，所述中和液和/或所述抗體親水化處理液采用pH7.4，20mM磷酸鹽緩沖液配制。