[發明專利]用于檢測單抗藥物和抗單抗藥物抗體的試劑及其應用

有效

• 申請號: 202010164159.2
• 申請日: 2020-03-11
• 公開（公告）號: CN111024958B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 肖智;李全;張建珍;焦守恕;何建偉;吳智廣;吳凡
• 申請（專利權）人: 同昕生物技術（北京）有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

1.用于檢測單抗藥物和抗單抗藥物抗體血藥濃度的試劑或試劑盒，包括解離液，其特征在于：所述解離液為pH2-3、8～10mM的甘氨酸緩沖液或醋酸-醋酸鈉緩沖液，其中含有體積分數為0.05%～0.1%的Tween-20、10～15μg/ml鼠IgG和10～15μg/ml人IgG；

還包括中和液和抗體親水化處理液；所述中和液含有體積分數為10～15%的馬血清；所述抗體親水化處理液含有10～15mg/ml的活性酯PEG羥基和/或活性酯PEG羧基。

2.根據權利要求1所述的試劑或試劑盒，其特征在于：所述中和液和/或所述抗體親水化處理液采用pH7.4，20mM磷酸鹽緩沖液配制。

3.根據權利要求2所述的試劑或試劑盒，其特征在于：所述解離液為pH2.5，10mM甘氨酸緩沖液，其中含有體積分數為0.05%的Tween-20、10μg/ml 鼠IgG和10μg/ml 人IgG；和/或所述中和液含有體積分數為10%的馬血清；和/或所述抗體親水化處理液含有10mg/ml的活性酯PEG400羥基、活性酯PEG2k羥基、活性酯PEG20k羥基、活性酯PEG400羧基、活性酯PEG2k羧基和/或活性酯PEG20k羧基。

4.根據權利要求3所述的試劑或試劑盒，其特征在于：所述甘氨酸緩沖液的配方為：每升超純水中含有甘氨酸 0.75g，用NaOH調節pH至2.5；所述醋酸-醋酸鈉緩沖液的配方為：每升超純水中含有醋酸0.57mL，用NaOH調節pH至2.5；所述磷酸鹽緩沖液的配方為：每升超純水中含有磷酸二氫鈉0.6g、磷酸氫二鈉5.8g，調節pH至7.4。

5.根據權利要求1-4任一所述的試劑或試劑盒，其特征在于：所述單抗藥物包括阿達木單抗、英夫利西單抗和益賽普；所述抗單抗藥物抗體包括抗阿達木單抗藥物抗體、抗英夫利西單抗藥物抗體和抗益賽普藥物抗體。

6.用于非診斷和治療目的的檢測單抗藥物血藥濃度的方法，包括如下步驟：

（1）取血清樣品，加入解離液，混勻；所述解離液為pH2-3、8～10mM的甘氨酸緩沖液或醋酸-醋酸鈉緩沖液，其中含有體積分數為0.05%～0.1%的Tween-20、10～15μg/ml鼠IgG和10～15μg/ml人IgG；

（2）置于37℃溫度下反應5-10 min；

（3）加入中和液，混勻；所述中和液中含有吖啶酯標記的抗單抗藥物抗體和體積分數為10～15%的馬血清；所述吖啶酯標記的抗單抗藥物抗體經過了親水化處理；所述親水化處理是指將吖啶酯標記的抗單抗藥物抗體與抗體親水化處理液混合后置于室溫下反應2-3小時；所述抗體親水化處理液含有10～15mg/ml的活性酯PEG羥基和/或活性酯PEG羧基；

（4）加入生物素化TNF-α，混勻；

（5）加入鏈霉親和素磁珠，混勻；

（6）置于37℃溫度下反應10-15 min；

（7）用清洗液洗滌磁珠；

（8）加入激發液，測定發光值，將發光值帶入標準曲線中，獲得血清樣品中所述單抗藥物的濃度。