[發(fā)明專利]一種新的多肽——P53腫瘤抗原蛋白13和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

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• 申請日: 1999-12-29
• 公開（公告）號: CN1301754A
• 公開（公告）日: 2001-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 復旦大學;上海博道基因技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
• 代理公司: 復旦大學專利事務所
• 代理人: 陸飛,姚靜芳

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——P53腫瘤抗原蛋白13，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

P53腫瘤抗原蛋白在轉(zhuǎn)化細胞中大量表達，在一些增殖的非轉(zhuǎn)化細胞中也發(fā)現(xiàn)有該蛋白的表達，但其表達量明顯低于前者。研究發(fā)現(xiàn)，在一些腫瘤及癌癥細胞中存在大量該蛋白的突變體。P53被認為是一種腫瘤抑制因子，但并不是對所有的腫瘤。對一些腫瘤P53不具有抑制作用，甚至還具有相反的副作用，如：卵巢腫瘤。在生物體內(nèi)，P53主要涉及各種細胞周期調(diào)控過程，其可能作為一種反式激活蛋白，通過調(diào)節(jié)細胞周期所需的一系列基因的表達來反向調(diào)節(jié)細胞的分裂。

細胞周期循環(huán)涉及一系列的過程，不同的階段由各種不同的調(diào)節(jié)因子通過正調(diào)控或負調(diào)控來共同完成。P53蛋白就是其中的一種非常常見的負調(diào)節(jié)因子。P53蛋白的突變，或其與DNA腫瘤病毒原癌基因產(chǎn)物的相互作用將導致癌癥的發(fā)生[Leine?A.J.,Momand?J.et?al.,1991,Nature,351:453-456]。由上可知，P53在生物體內(nèi)有著十分重要的作用，其通過調(diào)控細胞周期的各種中間調(diào)節(jié)物的表達來調(diào)節(jié)細胞的分裂與分化。該蛋白的表達異常通常與生物體內(nèi)的各種發(fā)育紊亂癥、各種腫瘤及癌癥等疾病的發(fā)生相關(guān)。

P53蛋白是一種磷蛋白，約由390個氨基酸殘基組成。該蛋白通常可分成四個結(jié)構(gòu)域：一個由75-80個氨基酸殘基組成的高度變換的酸性區(qū)域；一個富含脯氨酸的疏水性結(jié)構(gòu)域；一個蛋白中心區(qū)域和一個高度保守的C末端區(qū)域。在脊椎動物中，P53蛋白的氨基酸序列是高度保守的。????

研究發(fā)現(xiàn)，在P53蛋白的中心區(qū)域含有如下所示的一致性序列片段：M-C-N-S-S-C-M-G-G-M-M-N-R-R；所有不同來源的P53蛋白均含有這一保守的序列片段。該序列片段在生物體內(nèi)調(diào)節(jié)蛋白與SV40的T抗原結(jié)合，以產(chǎn)生對應的抗體，抑制腫瘤細胞的增殖。由此可知，P53蛋白在生物體內(nèi)主要作為一種細胞循環(huán)的負調(diào)節(jié)物，調(diào)節(jié)生物體內(nèi)的各細胞的正常循環(huán)。同時，其又是一種腫瘤抑制因子。其表達異常與生物體內(nèi)各種發(fā)育紊亂癥、一些腫瘤及癌癥的發(fā)生密切相關(guān)。特別的是其在卵巢癌中無抑制活性，相反其將促進該疾病的發(fā)生。

由于如上所述P53腫瘤抗原蛋白13蛋白在機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的P53腫瘤抗原蛋白13蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新P53腫瘤抗原蛋白13蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——P53腫瘤抗原蛋白13以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼P53腫瘤抗原蛋白13的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼P53腫瘤抗原蛋白13的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)P53腫瘤抗原蛋白13的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——P53腫瘤抗原蛋白13的抗體。本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——P53腫瘤抗原蛋白13的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與P53腫瘤抗原蛋白13異常相關(guān)的疾病的方法。本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中1716-2072位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-2434位的序列。

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導或轉(zhuǎn)染的宿主細胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細胞和回收表達產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。