[發明專利]一種新的多肽——gammal－吡咯啉－5－羥基還原酶14和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 99125800.2
• 申請日: 1999-12-27
• 公開（公告）號: CN1301851A
• 公開（公告）日: 2001-07-04
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N9/02;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/52;C12N15/63;C12N15/64;C07K14/00;C07K16/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/43;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--gamma1-吡咯啉-5-羥基還原酶14，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

在生物的氨基酸代謝及合成過程中，谷氨酸代謝中的碳和氮被用于脯氨酸及精氨酸的生物合成。脯氨酸在生物體內起著十分重要的生理學功能，脯氨酸殘基經翻譯后修飾生成4-羥基-L-脯氨酸，該氨基酸為某些蛋白尤其是膠原蛋白的重要組分。而眾所周知，膠原蛋白在生物體內涉及維持骨腱、血管、軟骨和皮膚強度等眾多的生物學過程，是生物體中的重要組成成分之一。

δ1-吡咯啉-5-羥基還原酶(P5CR)在生物體內催化從谷氨酸到脯氨酸的生物合成過程的最后一步，即NAD(P)依賴的1-吡咯啉-5-羥基氧化為脯氨酸。該酶的表達異常將直接影響生物體內脯氨酸的合成，進而影響一些相關的重要蛋白質的合成，即影響一些重要的生理過程。

1990年，Delauney?A.J.等人從大腸桿菌中克隆得到了一δ1-吡咯啉-5-羥基還原酶，該酶的序列與其它來源的δ1-吡咯啉-5-羥基還原酶亦有較高的同源性，研究發現，該酶在生物體內可能通過滲透調節來調節其表達[Delauney?A.J.,Verma?D.P.,Mol?Gen?Genet,221:299-305]。

δ1-吡咯啉-5-羥基還原酶在生物界的分布非常廣泛，從真細菌、古細菌到真核生物均存在該酶。該酶在這些生物體內均有著較高的序列相似性，δ1-吡咯啉-5-羥基還原酶的C末端均含有如下所示的保守的一致性序列片段：[PALF]-X(2,3)-[LIV]-X(3)-[LIVM]-[STAd]-[STV]-X-[GAN]-G-X-T-X(2)-[AG]-[LIV]-X(2)-[LMF]-[DENQK]；所有不同來源的δ1-吡咯啉-5-羥基還原酶均含有這一保守的序列片段，該序列片段可能是酶活性中心，該位點的突變將導致酶的失活，從而影響脯氨酸的最終合成及影響一系列相關的生物學過程。該蛋白在生物體內與一些脯氨酸代謝紊亂相關的疾病、膠原蛋白相關疾病的發生密切相關。

由于如上所述gamma1-吡咯啉-5-羥基還原酶14蛋白在機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的gamma1-吡咯啉-5-羥基還原酶14蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新gamma1-吡咯啉-5-羥基還原酶14蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--gamma1-吡咯啉-5-羥基還原酶14以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼gamma1-吡咯啉-5-羥基還原酶14的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼gamma1-吡咯啉-5-羥基還原酶14的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產gamma1-吡咯啉-5-羥基還原酶14的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--gamma1-吡咯啉-5-羥基還原酶14的抗體。本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--gamma1-吡咯啉-5-羥基還原酶14的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。本發明的另一個目的是提供診斷治療與gamma1-吡咯啉-5-羥基還原酶14異常相關的疾病的方法。本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中835-1218位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-1629位的序列。