[發明專利]一種新的多肽－RCC1蛋白10和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 99125720.0
• 申請日: 1999-12-23
• 公開（公告）號: CN1300761A
• 公開（公告）日: 2001-06-27
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 復旦大學;上海博道基因技術有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
• 代理公司: 復旦大學專利事務所
• 代理人: 陸飛,姚靜芳

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——RCC1蛋白10，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

在真核細胞周期中，核DNA復制(S期)和有絲分裂(M期)是聯系在一起的。DNA復制必須在有絲分裂開始之前完成。因此，必須要有一個系統監視未復制的DNA和轉導一個抑制信號以阻止有絲分裂因子的起始。DNA結合蛋白RCC1就是一個參與此過程的調節蛋白。RCC1是一個信號分子，它不但能發現未復制完的DNA，而且能產生抑制信號。RCC1突變體研究表明，它除了上訴功能之外，還有其它的細胞內調節功能。

RCC1家族蛋白有許多保守序列，甚至所有的RCC1家族蛋白保持了一個相似的結構。該家族蛋白包含7個串聯的重復單位組成的結構域，每個重復單位有50-60個氨基酸殘基。這些重復單位結構域組成了蛋白質的大部分區域。在重復單位區域以外由一個只有40-50個氨基酸殘基的小的N端結構域。RCC1家族幾乎所有的成員一般都包括以下兩個保守序列：1．G-X-N-D-X(2)-[AV]-L-G-R-X-T。2．[LIVMFA]-[STAGC](2)-G-X(2)-H-[STAGLI]-[LIVMFA]-X-[LIVM]。其中，X代表任意一個氨基酸。第一個序列位于第二個重復單位的N末端，是RCC1最保守的部分。第二個序列位于每一個重復單位的C末端的保守區域，并且在重復單位里有5個拷貝。

RCC1作為真核生物染色體凝聚的調節蛋白與染色質結合，與核GTP結合蛋白ran反應，促進結合GDP的解離的同時吸收新的GTP。因此，RCC1起了促進鳥嘌嚀核甘酸解離的作用。RCC1與ran的反應很可能在基因的表達中起了很重要的作用。

由于如上所述RCC1蛋白10蛋白在機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的RCC1蛋白10蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新RCC1蛋白10蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——RCC1蛋白10以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另—個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼RCC1蛋白10的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼RCC1蛋白10的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產RCC1蛋白10的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——RCC1蛋白10的抗體。本發明的另—個目的是提供了針對本發明多肽——RCC1蛋白10的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。本發明的另一個目的是提供診斷治療與RCC1蛋白10異常相關的疾病的方法。本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中755-1027位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-2076位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。

本發明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制RCC1蛋白10蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發明的多肽。本發明還涉及用該方法獲得的化合物。

本發明還涉及一種體外檢測與RCC1蛋白10蛋白異常表達相關的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本發明多肽的量或生物活性。

本發明也涉及一種藥物組合物，它含有本發明多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學上可接受的載體。