[發明專利]通過將編碼肌球蛋白重鏈SM1同型蛋白的DNA整合到載體DNA中而制備的重組DNA,含有該重組DNA的微生物和治療動脈硬化的藥劑

無效

• 申請號: 96192569.8
• 申請日: 1996-01-25
• 公開（公告）號: CN1178553A
• 公開（公告）日: 1998-04-08
• 發明（設計）人: 長谷川一英;荒川繪美;小田祥二;松田讓;高橋克仁;菅原理裕;石山晴生
• 申請（專利權）人: 株式會社容器研究實驗室
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N1/21;A61K38/17
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 盧新華,楊麗琴

技術領域

本發明涉及包含插入至載體DNA中的編碼肌球蛋白重鏈SM₁同種型蛋白DNA的重組DNA，攜帶該重組DNA的微生物和一種用于基因治療的包含該重組DNA的動脈硬化治療藥劑。

背景技術

平滑肌類型的肌球蛋白重鏈SM₁同種型蛋白負責平滑肌的收縮和松弛，并且是一種在平滑肌細胞中特異表達的肌球蛋白重鏈同種型蛋白。對于編碼該蛋白的DNA來說，編碼兔SM₁同種型cDNA的核苷酸序列(P.Babij等.：美國國家科學院院刊.88，10676(1991))是已知的，但是對這類DNA核苷酸序列間的任何同源性尚屬未知。進而，迄今也無人知曉包含插入載體DNA的編碼平滑肌類型肌球蛋白重鏈SM₁同種型蛋白DNA的重組DNA以及該重組DNA能被注射到動物細胞。

現已報道：存在于平滑肌細胞中的calponin蛋白其cDNA被導入大鼠肺動脈來源的血管平滑肌細胞系并表達時，細胞倍增時間延長大約4小時(Takahashi等：循環，88，I-174(1993))。當人calponin?cDNA注入兔局部位點，該處頸動脈已經氣囊擦傷，此時內膜的增厚被抑制(Takahashi等：循環，88，I-656(1993))。對包括插入載體DNA的編碼肌球蛋白重鏈SM₁同種型蛋白DNA的重組DNA具有藥理學效應并可用于基因治療則無報道。

動脈硬化的治療，經皮冠狀動脈腔內成形術(PTCA)是用氣囊導管使狹窄部位擴張，此途徑已獲廣泛應用。這種治療方法的優點是易于操作，成功率高于建立旁路的外科手術途徑等，但其缺陷在于30-40％的病人治療后由于血管內細胞的異常增殖而重新發生狹窄。因此這就需要一種有效治療動脈硬化的藥劑來防止這類再狹窄的發生。

發明公開

本發明包括：(1)重組DNA，其包括插入至載體DNA中的編碼平滑肌類型肌球蛋白重鏈SM₁同種型蛋白的DNA。(2)根據(1)的重組DNA，其中載體DNA是逆轉錄病毒載體、腺病毒載體、腺伴隨病毒載體或能在動物中表達的質粒。(3)根據(2)的重組DNA，其中能在動物中表達的質粒是PCXNZ或PAGE208。(4)根據(1)-(3)的任何一種的重組DNA，其中平滑肌類型肌球蛋白重鏈SM₁同種型蛋白是人平滑肌類型、兔肌類型或小鼠肌類型。(5)根據(1)-(3)的任何一種的重組DNA，其中編碼平滑肌類型的肌球蛋白重鏈SM₁同種型蛋白之核苷酸序列顯示在SEQ?ID?NO：1或核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1中所示，但其中至少有一個核苷酸被添加、缺失或替代。(6)編碼平滑肌類型肌球蛋白重鏈SM₁同種型蛋白的DNA，其核苷酸序列顯示在SEQ?ID?NO：1或顯示在SEQ?ID?NO：1的核苷酸序列中，但其中至少一個核苷酸被添加、缺失或替代。(7)攜帶(5)述及的重組DNA的微生物。(8)根據(7)的微生物，該微生物屬于大腸桿菌屬。(9)治療動脈硬化的藥劑，包括(1)-(5)任一項中述及的重組DNA。

編碼平滑肌類型肌球蛋白重鏈SM₁同種型蛋白的DNA，包括編碼平滑肌肌球蛋白重鏈SM₁同種型蛋白的cDNA或基因組DNA，優選來自人、兔、小鼠等的DNA。