[發明專利]脫氧核糖核酸筆式瓊脂糖凝膠電洗脫器及應用

無效

• 申請號: 96119505.3
• 申請日: 1996-10-24
• 公開（公告）號: CN1180710A
• 公開（公告）日: 1998-05-06
• 發明（設計）人: 蘭榮良;蘭莉
• 申請（專利權）人: 蘭榮良
• 主分類號: C07H21/04
• 分類號: C07H21/04;C07H1/06
• 代理公司: 中國科學院沈陽專利事務所
• 代理人: 汪惠民

本發明提供一種分離和純化脫氧核糖核酸(DNA)的裝置筆式瓊脂糖凝膠電洗脫器及利用該裝置制備DNA的方法。

脫氧核糖核酸是一種具有遺傳性質的生物大分子，由戊糖和四種堿基即鳥嘌呤，腺嘌呤，胞嘧啶和胸腺嘧啶及磷酸組成。基因工程的一項重要技術就是DNA重組技術，在這一技術中，有質粒等數種DNA載體，因為這些載體含有一些對于它們在細菌中增殖并非必要的DNA區段，插入這些區段的外源DNA(準備研究的某種生物的DNA分子)片段可與載體共價連接并能象載體正常組分一樣進行復制和增殖，所以，這些載體可以克隆外源DNA片段。DNA也是基因的物質基礎，1個基因就是DNA長鏈上的1個結構單位，每一個物種和每一個基因也都有各自獨特的DNA結構。DNA重組等基因工程技術已在動植物微生物，食品，醫藥等各個領域發揮了巨大作用并正在進一步發展。在分子生物學與基因工程實驗室中，DNA重組技術用得十分普遍，其中更為常用的一項最基本的技術就是從含有兩種或兩種以上的不同大小的DNA片段的混合物中(如內切酶酶解的DNA)分離純化特定分子量的DNA片段。

多年來，已積累了數種用瓊脂糖凝膠分離純化DNA的方法，如DEAE纖維素即二乙基氨基乙基(DEAE)纖維素紙插片電泳法，透析袋電泳洗脫法，槽溝電泳洗脫法，″V″字型內槽電洗脫法，″眼鏡″槽電洗脫法以及低熔點瓊脂糖凝膠回收法。上述幾種方法用得最多的屬低熔點瓊脂糖凝膠回收法，但這種方法不足之處是低熔點瓊脂糖價格昂貴，而其它幾種方法在實驗室并不常用，因為這些方法的一個共同缺點是操作復雜，容易失敗，回收率低。并且DEAE纖維素紙插片法還不適于大分子雙鏈DNA片段和任何大小的單鏈DNA片段的回收。透析袋法回收液體體積太大，槽溝電泳法中的小槽溝是難于制備的，如制備大槽溝會導至體積增大，凝膠與槽溝液面及電泳槽中液面卻要平齊，難以掌握，而″V″字型內槽電洗脫法是憑借″V″字型內槽溝內的鹽濃度遠遠高于外面電泳液的鹽濃度來實現的，回收液(即高鹽緩沖液)與普通緩沖液也是相通的，這給準確操作帶來很大難度，也容易導至實驗失敗。″眼鏡″槽電洗脫法不僅與″V″字型內槽電洗脫法一樣購置特殊裝置，而且回收成功率更低，幾乎無人應用。

本發明的目的是提供一種用于分離和純化DNA的電泳裝置，即DNA筆式瓊脂糖凝膠電洗脫器。該裝置可以做到經濟，實用，操作方便，快捷的分離和純化DNA，其回收率可達90％以上，質量也能滿足酶切，連接等分子克隆的需要。

本發明的電洗脫器仍然是采用瓊脂糖凝膠電泳法來分離和純化DNA，這種裝置的特征是呈筆式的結構。具體地說本發明的DNA筆式瓊脂糖凝膠電洗脫器是由凝膠管和接收帽兩部分組成。其中凝膠管為一細長的錐形筒，錐形筒靠近大口端帶有一環狀突起，在小口端帶有一凸環，環狀突起是為固定凝膠管內的凝膠，而凸環是為安裝接收帽而設計的；接收帽也為一錐形細長筒，其大口端套在凝膠管的小口端上，且相應小口端的凸環，在接收帽大口端內壁帶有一溝槽，借凸環和溝槽的密接配合使接收帽安裝在凝膠管上。接收帽的小口端用透析袋包封，同時為使凝膠管與接收帽間具有較好的密閉性加有橡膠圈。上述凝膠管和接收帽可用塑料，聚氨酯等高分子樹脂制成，其它部分與普通的電泳法所用裝置的材料相同。作為較佳的電洗脫器，其凝膠管制成長120～60mm，大口端內徑20～10mm，小口端外徑15～8mm，壁厚1～3mm的錐形筒，在錐形筒靠近大口端一側帶有高和寬2～5mm，長5～63mm的環狀突起；接收帽制成長50～20mm，大口端內徑15～8mm，小口端外徑8～4mm，壁厚1～2mm的錐形筒，接收帽小口端用單層透析袋緊包封住，在凝膠管上安裝接收帽時在接收帽內靠近凝膠管小口端外側加有橡膠密封圈。

由于電洗脫器在使用中是將凝膠管水平放置在電脈槽中，為固定凝膠管又附設一底痤。為便于凝膠管安裝固定，也可在凝膠管上帶有一底托，通過底托將凝膠管固定在底座上。

利用上述的凝膠管和接收帽制成電洗脫器的方法如下：

1.在凝膠管內灌注瓊脂糖凝膠；

2.用處理好的透析袋緊包在接收帽的小口端，并固定好后，于接收帽中注入電泳緩沖液至溝槽處。

3.將凝膠管小口端插入接收帽大口端內，使凝膠面與電泳緩沖液相接觸，并保證接收帽內無氣泡存在，即可制成實用的電洗脫器。下面通過附圖和實例對本發明的技術給予進一步地說明。

附圖1為本發明的電洗脫器結構示意圖(局剖)；

附圖2為本發明的電洗脫器使用示意圖。

附圖中，1.凝膠管；2.接收帽；3.透析袋；4.底座；5.底托；6.橡膠圈；7.電泳槽；8.電泳儀；9.突起。