[發明專利]蚯蚓纖溶酶的制取方法

無效

• 申請號: 96117536.2
• 申請日: 1996-04-26
• 公開（公告）號: CN1163932A
• 公開（公告）日: 1997-11-05
• 發明（設計）人: 夏洪萍
• 申請（專利權）人: 夏洪萍
• 主分類號: C12N9/68
• 分類號: C12N9/68
• 代理公司: 重慶巴山專利事務所
• 代理人: 張利

本發明涉及一種蚯蚓纖溶酶的制取方法。

已往制取蚯蚓纖溶酶的方法，如中國專利申請號為88101579.2的方法，均須采取冰凍干燥、凝膠電泳、離子交換、透析、層析等高成本的生物化學手段，生產設備投資昂貴，生產工藝復雜，從而使得蚯蚓纖溶酶很昂貴。市場上出現的藥品博洛克、普恩復口服膠囊，也是應用蚯蚓纖溶酶制取的防治血栓疾病的藥品，雖效果較好，但價格昂貴、產量有限，難以滿足市場的需求。

本發明的目的在于提供一種制造工藝簡單、產品收率高、生產成本低的蚯蚓纖溶酶的制取方法。

本發明的目的是這樣實現的：利用腸溶膠囊可進入腸道吸收消化這一特點，避開已有技術為分離純化而采用的一系列高成本的生物化學手段，選用適用的常規生物化學手段，重點是突破了提取液的配制，能夠有效地提制蚯蚓體中的纖溶酶。

蚯蚓纖溶酶本身是一種活性較高的蛋白水解酶，能直接水解纖維蛋白，而人體血管內的血栓就是纖維蛋白組成的，所以蚯蚓纖溶酶具有防治血栓的作用；同時，它還能將人體中的纖維蛋白溶酶原激活成纖維蛋白溶酶，從而進一步增強了對纖維蛋白的水解作用。

本發明的實驗表明，不同的提取液對產品收率有顯著的影響，對產品的活性也有一定的影響，以往的提制方法往往是先將蚯蚓勻漿，加入提取液，提取液采用鹽液或緩沖液，提取時間長達2-3天，因勻漿過濾流失很多活性物質，故產品收率低，活性也不夠高。本發明的要點在于以潔凈的水為提取液，既不需要除鹽，提取時間僅需一晝夜，活性物質收率高，產品活性也高。酶粉的收率可達2-3％，溶纖活力大于12000國際單位/g，經測定該酶的分子量在30000道爾頓左右。

本發明的具體制法如下：

1、蚓體凈化：將蚯蚓備料洗凈。

2、提制：用蒸餾水加防腐劑苯甲酸鈉，直接加入洗凈的5000g無毒餌飼料人工養殖的鮮蚯蚓或洗凈解凍的蚯蚓，其適量百分比為：蚯蚓∶水∶苯甲酸鈉＝1∶0.2-1∶1‰-3‰，置于恒溫箱內，在20-50℃下保溫提取，溫度過高則酶活性易遭破壞，溫度過低蚯蚓又難于自溶，約24小時后全部蚯蚓即可自溶，比以往的方法省工、省時、自溶更好、收率更高。防腐劑也可以使用山梨醇。

3、分離：將蚯蚓自溶液過濾，除去殘渣、雜物、將濾液離心15-20分鐘，轉速為每分鐘3000-4000轉，保留上清液，棄去漿狀沉淀物。

4、沉淀：將上述上清液加入95％的醫用酒精，用比重計測試，將濃度調整到50-85％，靜置沉淀12小時，虹吸出上清液(可回收其中灑精再用)，將沉淀物加丙酮脫水，攪勻后再離心，除去上清液(可回收其中丙酮再用)，將沉淀物加乙醚脫脂，乙醚揮發后，最后剩下的淺褐色沉淀物進入下道工序。

5、干燥：將上述脫水，脫脂后的漿狀沉淀物置于搪瓷盆中攤開，放入真空干燥箱中，在室溫條件下抽真空約35-45分鐘，盆中沉淀物顏色變淺、干燥、取出磨細，用80-100目篩網過篩，即獲得蚯蚓纖溶酶粉狀產品。經檢測分子量約30000，溶纖活力大于10000IU/g。

6、配制膠囊：用酶粉1Kg加可溶性淀粉8Kg，可裝制口服膠囊30000粒，每粒膠囊含纖溶酶300國際活性單位以上。

本發明的產品是易溶于水的淺褐色粉末或類白色粉末，適于配制腸溶片劑或腸溶膠囊，具有防治栓塞性心腦血管疾病的效果。采用本發明的方法，可以方便、經濟、有效地從蚯蚓體內分離出蚯蚓纖溶酶，使以往昂貴的防治血栓疾病藥品得以大批量生產，為人類造福。

下面提供提取液的三個實施例。

實施例1：蚯蚓5000g，水1500ml，苯鉀酸鈉35g。

實施例2：蚯蚓5000g，蒸餾水2000ml，苯鉀酸鈉45g。

實施例3：蚯蚓5000g，溫開水3000ml，山梨醇50g。