[發明專利]可促進人肺腺癌細胞分化的cDNA及其真核表達載體及應用

無效

• 申請號: 96109216.5
• 申請日: 1996-07-26
• 公開（公告）號: CN1172164A
• 公開（公告）日: 1998-02-04
• 發明（設計）人: 黎伯銓;王秀琴;吳旻
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院腫瘤醫院腫瘤研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/79;A61K48/00
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 程偉,劉國平

本發明涉及一種能促進人肺腺癌細胞分化的cDNA，包含該cDNA的真核表達載體以及該cDNA在制備治療腫瘤的制劑中的應用。所述的cDNA是從維甲酸處理的人肺腺癌細胞系中分離得到。

肺癌對人類生命、健康的威脅日趨嚴重，在工業發達國家和地區，男性肺癌發病率高居各類腫瘤之首，女性肺癌發病率僅次于乳腺癌而居第二位。在我國，肺癌發病率有超過胃癌而躍居第一位的趨勢。肺癌患者預后很差。其五年生存率僅為10-15％，其中小細胞肺癌五年生存率低于5％。20余年來，盡管對某些腫瘤的治療取得了成功或取得重大進展，但傳統的手術、放療和化療三大療法并未能改善大多數肺癌患者的預后，降低死亡率。近20年來，腫瘤分子生物學研究取得了重大進展。現已明確，癌的發生是細胞增殖失控和分化障礙的結果，細胞癌基因的激活和抑癌基因的失活是造成細胞生長與分化調控紊亂的根本原因。因此，應用各種方法分離腫瘤抑制基因或促分化基因，對于闡明腫瘤發生的內在機制和設計有效防治措施都具有重要意義。

維甲酸(Retinoic?Acid.，RA)是維生素A的代謝產物，對人體的正常形態發生、發育和細胞分化起重要調節作用。近10多年的研究結果表明，RA對某些完全轉化的、具有轉移性的腫瘤細胞產生增生抑制或誘導終末分化作用，能夠使某些腫瘤的惡性程度降低或去惡性化。盡管并不是各種腫瘤都對RA有這樣的反應，然而，這些發現無疑對腫瘤治療提供了一個新線索。在很多情況下，惡性腫瘤是一種細胞異常分化的疾病，對于那些具有侵襲性的細胞可以通過調節其細胞分化而不是應用細胞毒藥物殺死細胞的方法得到控制。由此為RA的腫瘤分化治療作用提供了理論依據。

由于RA對多種腫瘤的增殖抑制和/或分化誘導作用，使其成為某些惡性腫瘤的分化誘導劑和化學預防劑。中國醫學科學院腫瘤研究所林培中等(中華腫瘤雜志10(3)：161-166，1988；中國醫學科學院學報12(4)：235-245，1990)從80年代初即開始用我國新研制的維甲類化合物在食管癌高發區進行食管癌的阻斷性研究，使有食管粘膜重度增生者的癌變率明顯降低；黃萌茸等(Huang?ME，Ye?YuChen?et?al，Blood?73：567-572，1988)在國際上首次用全反式維甲酸治療急性早幼粒白血病患者取得成功。但RA對細胞增殖分化調節的分子機制一直是個謎。近10年來，隨著維甲酸受體基因的克隆，對這個問題的認識發生了質的飛躍。目前認為，維甲酸作用的機制是：維甲酸與細胞核內的維甲酸受體結合后作為轉錄因子與特異性順式作用DNA序列結合，調節靶基因的轉錄活性。雖然受調控基因的具體數量和順序尚未弄清，但一般認為維甲酸是啟動了級聯(Cascade)式的轉錄調節，導致一系列分化基因的激活和增殖基因的受抑。至今已有越來越多的RA靶基因得到認識，也分離、克隆出了一些引起細胞分化的新基因。這不僅使腫瘤細胞分化治療的理論認識深化了一步，也有可能成為一類惡性腫瘤基因治療的目的基因。80年代末，本室在發現RA可引起食管癌細胞系生長的抑制及終末分化的基礎上，應用cDNA消減雜交技術，已從誘導分化的食管癌細胞系中分離出一個具有抑癌作用的cDNA片段(見中國專利申請95101293.2)。

因此，本發明的第一個目的在于提供一種可促進人肺腺癌細胞分化的cDNA，所述的cDNA是從維甲酸處理的人肺腺癌細胞系中分離得到，其對人肺腺癌細胞等腫瘤細胞具有明顯的生長抑制作用。

本發明的第二個目的在于提供包含所述的cDNA的真核表達載體。

本發明的第三個目的在于該cDNA在制備治療腫瘤的制劑中的應用。

相應地，根據本發明的一個方面，本發明涉及一種可促進人肺腺癌細胞分化的cDNA，其全長為1859bp，核苷酸序列見序列表(SEQ?ID?NO：1)。所述的cDNA是通過用全反式維甲酸誘導人肺腺癌細胞系GLC-82使其發生分化，從其cDNA文庫中利用cDNA消減雜交分離得到。