[發(fā)明專利]枯草蛋白酶309突變體吸附作用降低而水解作用增強(qiáng)無效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 95193744.8 | 申請(qǐng)日： | 1995-04-18 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN1151187A | 公開（公告）日： | 1997-06-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | P·F·布羅德三世;B·L·巴尼特;D·N·魯賓;C·K·高希 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 普羅格特-甘布爾公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/57 | 分類號(hào)： | C12N15/57;C12N9/54;C11D3/386 |
| 代理公司： | 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 | 代理人： | 盧新華,王景朝 |
| 地址： | 美國(guó)俄*** | 國(guó)省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 枯草 蛋白酶 309 突變體 吸附 作用 降低 水解 增強(qiáng) | ||
1.一種具有修飾的枯草蛋白酶309野生型氨基酸序列的枯草蛋白酶309突變體，其特征在于修飾的氨基酸序列包含在如下一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)的替換：193，194，195，196，197，199，200，201，202，203，204，205，206，207，208，209，210，211，212，213，或214。其中：
a.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在193位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Cys、Ala、His、Thr、Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu；
b.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在194位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：His、Thr、Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。
c.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在195位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。
d.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在196位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Pro、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。
e.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在197位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Met、Cys、Ala、His、Pro、Gly、Gln、Ser、Asp或Glu。
f.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在199位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Met、Cys、Ala、His、Thr、Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。
g.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在200位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Asn、Ser或Ser。
h.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在201位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Asp或Glu。
i.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在202位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。
j.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在203位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Ile、Met、Ala、His、Pro、Gln、Asn、Ser或Asp。
k.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在204位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。
l.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在205位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Pro、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。
m.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在206位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Asp或Glu。
n.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在207位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、或Glu。
o.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在208位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Leu、Ile、Val、Met、Cys、Ala、His、Pro、Gly、Gln、Asn、Asp或Glu。
p.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在209位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：His、Thr、Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。
q.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在201位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Asp或Glu。
r.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在211位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Ile、Val、Met、Cys、Ala、His、Thr、Pro、Gly、Gln、Asn、Ser或Asp；
s.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在212位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Glu；
t，當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在213位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Pro、Gln、Asn、Ser、Asp、Ser或Glu；
u.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在214位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Pro、Gly、Gln、Asn、Asp或Glu。
這些突變使得枯草蛋白酶309突變體與野生型相比對(duì)于不溶性底物具有降低的吸附作用和增強(qiáng)的水解作用；其中優(yōu)選地為：
i.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在200位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為Ser；
ii.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在205位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為Pro、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu；
iii.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在208位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為L(zhǎng)eu、Ile、Val、Met、Cys、Ala、His、Pro、Gly、Gln、Asn、Asp或Glu
iv.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在209位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Pro、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu；
v.當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在210位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為：Asp或Glu。
更優(yōu)選的是：當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在如下一個(gè)或位點(diǎn)：193，194，195，196，197，199，201，202，203，204，205，206，207，208，209，210，211，212，213或214，用于替換任何位點(diǎn)：193，194，195，196，197，199，201，202，204，205，206，208，209，210，211，212，213或214的氨基酸為Asp或Glu；當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在203位點(diǎn)，用于替換的氨基酸為Asp；而當(dāng)一個(gè)替換發(fā)生在位點(diǎn)207或212一個(gè)或兩個(gè)時(shí)，用于替換207或212的氨基酸為Glu。
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