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[發(fā)明專利]胸苷激酶突變體無效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 95193717.0 申請日: 1995-05-02
公開(公告)號: CN1151186A 公開(公告)日: 1997-06-04
發(fā)明(設計)人: L·A·羅布;M·E·布萊克 申請(專利權(quán))人: 華盛頓大學
主分類號: C12N15/54 分類號: C12N15/54;C12N15/86;C12N9/12;A61K48/00
代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務所 代理人: 李瑛
地址: 美國*** 國省代碼: 暫無信息
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 激酶 突變體
【權(quán)利要求書】:

1.一種編碼包含一個或多個突變的Herpesviridae胸苷激酶的分離的核酸分子,至少一個所說的突變是一個DRH核苷結(jié)合位點下游的5位氨基酸取代,這種取代增加所說胸苷激酶的生物學活性(與未突變的胸苷激酶比較)。

2.按照權(quán)利要求1的編碼一種胸苷激酶的分離的核酸分子,其中蛋氨酸或酪氨酸取代所說DRH核苷結(jié)合位點下游的5位氨基酸。

3.按照權(quán)利要求1的編碼一種胸苷激酶的分離的核酸分子,進一步包含纈氨酸取代所說DRH核苷結(jié)合位點下游的4位氨基酸。

4.按照權(quán)利要求1的編碼一種胸苷激酶的分離的核酸分子,進一步包含半胱氨酸取代所說DRH核苷結(jié)合位點下游的6位氨基酸。

5.一種編碼包含一個或多個突變的Herpesviridae胸苷激酶的分離的核酸分子,至少一個所說的突變是半胱氨酸取代一個DRH核苷結(jié)合位點下游的6位氨基酸,這種取代增加所說胸苷激酶的生物學活性(與未突變的胸苷激酶比較)。

6.一種編碼包含至少四個突變的Herpesviridae胸苷激酶的分離的核酸分子,這種突變增加所說胸苷激酶的生物學活性(與未突變的胸苷激酶比較),所說突變包括一個DRH核苷結(jié)合位點上游的2位氨基酸突變成亮氨酸、所說DRH核苷結(jié)合位點上游的1位氨基酸突變成亮氨酸、所說DRH核苷結(jié)合位點下游的4位氨基酸突變成纈氨酸、所說DRH核苷結(jié)合位點下游的5位氨基酸突變成蛋氨酸。

7.一種編碼包含至少四個突變的Herpesviridae胸苷激酶的分離的核酸分子,這種取代增加所說胸苷激酶的生物學活性(與未突變的胸苷激酶比較),所說突變包括一個DRH核苷結(jié)合位點上游的1位氨基酸突變成亮氨酸、所說DRH核苷結(jié)合位點下游的4位氨基酸突變成纈氨酸、所說DRH核苷結(jié)合位點下游的5位氨基酸突變成酪氨酸。所說DRH核苷結(jié)合位點下游的6位氨基酸突變成半胱氨酸。

8.按照權(quán)利要求1-7之任一編碼一種胸苷激酶的分離的核酸分子,其中所說的胸苷激酶選自單純皰疹病毒1型胸苷激酶和單純皰疹病毒2型胸苷激酶。

9.按照權(quán)利要求1-7之任一編碼一種胸苷激酶的分離的核酸分子,其中所說的酶是截短的或者包含符合讀框的缺失。

10.按照權(quán)利要求1-7之任一編碼一種胸苷激酶的分離的核酸分子,其中所說的胸苷激酶能夠磷酸化核苷類似物,其磷酸化核苷類似物的能力至少超過野生型胸苷激酶的一倍。

11.按照權(quán)利要求10的分離的核酸分子,其中所說的核苷類似物選自下列物質(zhì):ganciclovir、無環(huán)鳥苷、三氟胸苷、1-[2-脫氧,2-氟,(-D-阿糖呋喃基]-5-碘尿嘧碇、ara-A、araT?1-(-D-阿糖呋喃氧基胸腺嘧啶、5-乙基-2′-脫氧尿苷、5-碘代-5′-氨基-2,5′-二脫氧尿苷、碘苷、AZT、AIU、二脫氧胞苷和AraC。

12.按照權(quán)利要求1-7之任一編碼一種胸苷激酶的分離的核酸分子,其中所說的胸苷激酶能夠磷酸化核苷類似物,并且其中 Z > [ ( TKmNAp ) / ( TKmTp ) ( TKwtNAp ) / ( TKwtTp ) ] ]]>式中TKmNAp是胸苷激酶突變體引起的核苷類似物磷酸化率,TKmTp是胸苷激酶突變體引起的胸苷激酶磷酸化率,TKwtNAp是未突變的胸苷激酶引起的核苷類似物磷酸化率,TKwtTp是未突變的胸苷激酶引起的胸苷激酶磷酸化率,Z選自1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5和5。

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