[發明專利]對弱疫苗抗原提供胸腺相關幫助的脂質體的制備方法

無效

• 申請號: 91105793.5
• 申請日: 1991-07-27
• 公開（公告）號: CN1032236C
• 公開（公告）日: 1996-07-10
• 發明（設計）人: 霍華德·R·西克斯;納塔莉·加肯
• 申請（專利權）人: 研究發展基金會
• 主分類號: A61K47/00
• 分類號: A61K47/00;A61K39/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所
• 代理人: 張恒康

本發明涉及通過把靶抗原與一附加組分一起摻入一脂質體，從而提高對靶抗原的抗體反應，其中該組分至少含有一T輔助淋巴細胞識別部位。

一個疫苗抗原通過誘導生物產生免疫反應來使該生物具有對感染的免疫性，因此，抗原作用的大小取決于它們誘導的免疫反應強度的高低。現有強度可變的固有的強和弱的抗原。此外，抗原可以分類為胸腺(“T”)相關或T獨立抗原，這基于它們是否能夠從T細胞引發出輔助活力。這種T細胞活力與IgG和IgA類抗體的產生有關；T獨立抗原誘導IgM抗體的產生，但不誘導B細胞，以控制IgG或IgA抗體的合成與否。產生IgM類免疫球蛋白在實驗動物和人類中是暫時的反應，僅持續幾個月；但是產生IgG和IgA類抗體通常持續幾年。因此，引出對特殊抗原的T相關反應是有益的。糖類或多糖類基抗原是T獨立抗原，并且僅限于用作兒童疫苗。同樣許多表示抗體識別部位的多肽是T獨立抗原，因此，同樣也不能產生對一種疫苗所希望的IgG和IgA抗體反應。

人們已經知道，通過把抗原接合(共價附著)到一個提高免疫反應的輔助蛋白質上，一個較強的抗體反應可能引出一弱抗原。例如美國專利4761283表明，通過把該抗原接合到一細菌輔助蛋白上，對待定的細菌膠囊狀聚合物的弱的產生免疫性的反應被提高，細菌輔助蛋白本身誘導一抗原反應。用一毒素作輔助蛋白是人所共知的，例如，用白喉類毒素。但是，用這樣一個有毒的輔助蛋白會引起一個問題，因為該輔助蛋白的內源毒性可能限制抗原—輔助蛋白接合體的劑量，從而限制了它的有效性。

生物對引起抗原決定部位抑制效應的輔助蛋白的早期免疫接種作用會抑制對靶抗原的免疫反應，這也是眾所周知的。當宿主生物準備對輔助蛋白反應時，該生物將在它可能開始對靶抗原免疫反應前清除該靶抗原—輔助蛋白接合體。

這些以前應用的接合體是通過把抗原共價連接到載體輔助蛋白上來形成的。免疫反應的提高對T獨立抗原是特別重要的，T獨立抗原可以接合到一包含至少一個T輔助細胞識別部位的肽上，從而得到一個對T獨立抗原的T相關反應。但是，現在應用的共價連接接合體效果有限，這是由于共價結合過程中帶來的結構性的限制(即構象變化，結合部位潛在的不可及度，以及無法改變這些組分比率)。此外，這些接合體可能存在劑量上的限制以及抗原決定部位抑制效應。

脂質體是由類脂分散在水介質中形成的膜狀的泡。制備脂質體的方法對該領域的普通技術人員來說是公知的，并且作為例子在作為參考文獻列出的下述專利(而不限于這些專利)中被加以說明：美國專利4565696和4235871。脂質體具有對一活體內載體所需的幾個性質，如低毒性，低免疫原性，并具有生物降解能力。它還表明在實驗動物中脂質體可提高對抗原的抗體反應。抗原或者被俘獲在脂質體的水溶性的部分，或者與雙層相締合。例如，美國專利4565696描述了對把免疫原共價連接到脂質體的表面雙層上，并因此加強該免疫反應的步驟。

本發明涉及提供通過把該抗原與至少一個輔助肽(如至少包含一T細胞識別部位的輔助肽)一起摻進一種脂質體制劑中去，從而提高對一靶抗原的抗原反應。本發明可用于提高所引出的對任何抗原的抗原反應；包括(但不限于)聚多糖類抗原，如流感嗜血桿菌(Hemophilus?influenza)、腦膜炎雙球菌(Meningococci)、肺炎雙球菌(Pneumocicci)和鏈球菌(Streptococci)，以及肽類，如肝炎B表面蛋白，HIV表面蛋白，流行性感冒病毒蛋白，副流行感冒病毒肽類或血球凝集素，以及霍亂表面糖蛋白。

通過把靶抗原附著到包含一活性官能度的許多種不同的類脂材料之一上來，可以把靶抗原(人們希望提高對它的免疫反應)摻入到脂質體泡中去。這些類脂材料包括磷脂酰醚或磷脂酰酯(例如磷脂酰乙醇胺和磷脂酰膽堿)、甘油酯類、腦苷脂類、神經節苷脂類、神經鞘磷脂類、以及類固醇類(例如，膽固醇)等等。美國專利4565696和4235871公開了用于制備脂質體的其它類脂材料。

另一方面，如果靶抗原帶有一親脂基團的話，該靶抗原可以通過疏水力摻入到脂質體泡中去，見美國專利4448765，或者，一疏水基團可附著到該抗原上。