[其他]豬痢疾密螺旋體抗原及其應用

無效

• 申請號: 88101372
• 申請日: 1988-03-16
• 公開（公告）號: CN88101372A
• 公開（公告）日: 1988-10-05
• 發明（設計）人: 米歇爾·麥克卡門;杰福利·D·蓋勃
• 申請（專利權）人: ML技術投資有限公司
• 主分類號: A61K39/02
• 分類號: A61K39/02;G01N33/543
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 李瑛

本發明涉及豬痢疾密螺旋體，尤其是豬痢疾密螺旋體抗原。更進一步，本發明涉及一種豬痢疾疫苗，及一種測定豬痢疾密螺旋體抗體存在的方法。

豬痢疾是普遍存在于所有養豬國家里的一種嚴重傳染病。其癥狀是嚴重的粘液出血性腹瀉，脫水和體重下降。

已發現豬痢疾是由豬痢疾密螺旋體引起的，這是一種厭氧的β-溶血性的螺旋體。

這種疾病是由于攝食了來自急性感染了豬痢疾的豬或無癥狀病原攜帶豬的含有豬痢疾密螺旋體的糞便或是農具及運輸裝置所擴散的排泄物而引起。

曾有過多種嘗試企圖提供一種抗豬痢疾密螺旋體的疫苗，這些嘗試通常利用了整個密螺旋體生物。

時至今日，仍需要一種有效的抗豬痢疾密螺旋體的疫苗。

按照本發明的一個方面，提供了預防豬痢疾的一種疫苗和一種方法。

按照本發明的另一方面，提供了一種確定豬痢疾密螺旋體抗體存在的檢測方法和檢測盒。

按照本發明的第一個方面，提供了一種預防豬痢疾的疫苗，其至少含有一種豬痢疾密螺旋體的抗原和/或其片段。

更確切地說，用來提供疫苗的豬痢疾密螺旋體蛋白質抗原（一種或多種）具有19，000道爾頓至90，000道爾頓范圍內的分子量，大多數為至少25，000道爾頓。在一個優選實例中，抗原分子量不超過65，000道爾頓。

通常，這些抗原還對從豬痢疾中恢復后的患豬的血清有免疫活性。

再具體地說，疫苗包括一種或多種豬痢疾密螺旋體抗原（或抗原的片段），其具有下述分子量：19，000道爾頓;29，000道爾頓;30，000道爾頓;31，000道爾頓;34，000道爾頓;36，000道爾頓;38，000道爾頓;39，000道爾頓;42，000道爾頓;44，000道爾頓;及60，000道爾頓。在一個優選實例中，疫苗包括上述抗原中的數種;例如36，000和60，000道爾頓抗原或其片段的組合物;29，000，31，000，34，000，38，000，39，000，42，000和44，000抗原或其片段的混合物，等等。標志這些抗原的分子量通過不連續聚丙烯酰胺凝膠電泳技術得到，電泳中采用了Laemmli在Nature????227;680～85（London????1970）中描述的SDS緩沖體系，其中丙烯酰胺濃度為10～17%，雙丙烯酰胺與丙烯酰胺比例為1∶29。

在一個實例中，用來制備抗豬痢疾疫苗的豬痢疾密螺旋體蛋白質抗原或多種抗原最好用這種方法得到，將豬痢疾密螺旋體生物體的表面抗原或膜抗原溶解，不要溶解或裂解該生物體。根據一特別優選的實例，通過處理未溶胞的或整個生物體來溶解豬痢疾密螺旋體抗原，雖然在某些情況下可以從溶胞的或聲波處理過的生物體上獲得這樣的可溶表面抗原。

這種溶解作用最好采用合適的去污劑和/或一種離液序列高的試劑，其不損壞豬痢疾密螺旋體蛋白質抗原的抗原特性。去污劑或者表面活性劑可以是任何一種去污劑，包括陽離子型，非離子型和陰離子型表面活性劑。這些表面活性劑一般都是本專業領域中已知的，包括用環氧乙烷，各種肥皂堿金屬鹽，硫酸鹽，或磺化油，各種胺類，四價鹽及類似物得到的濃縮產品。優選去污劑包括十二烷基堿金屬硫酸鹽，十二烷酰肌氨酸;環氧乙烷的非離子型濃縮產物〔例如吐溫20（Tween20）等等〕。

作為合適的離液序列高試劑的代表性例子，可以提及：尿素，氯化鋰，胍，氯化氫，及其類似物。

溶解試劑，無論其是一表面活性劑還是一離液序列高試劑，優選用量為足夠溶解抗原而不損壞或溶解整個生物體。通常，溶解試劑與密螺旋體生物體重量比值為0.05～1比0.1～1，優選為0.1～1比0.5～1。

溶解在這樣的溫度下進行，它對抗原無逆向影響，這樣的溫度通常介于15℃～25℃之間。類似地選擇pH以保持其穩定，通常pH值不大于7.0最常用的是介于4.5～5.0。

密螺旋體的處理時間要足夠長以進行抗原的溶解，通常時間為1～2小時;但在某些情況下可采用更長些或更短些的時間。

用溶解技術回收所需表面抗原的最佳條件的選擇是本專業領域普通技術人員熟知的。按上面所指出的，條件和溶解試劑的選擇要能夠得到抗原而不溶解或打碎整個細胞。

因此，按照本發明適合用于疫苗的抗原或多種抗原的一個特性是，豬痢疾密螺旋體抗原對應于這樣一種或多種抗原，后者通過用去污劑處理豬痢疾密螺旋體溶解得到，這種處理方法并不溶解或打碎密螺旋體，盡管該一種或多種抗原也可以用與上述溶解過程不同的方法得到。