[其他]微生物培養和檢測的設備和方法

無效

• 申請號: 87106707
• 申請日: 1987-08-28
• 公開（公告）號: CN87106707A
• 公開（公告）日: 1988-05-11
• 發明（設計）人: 羅伊·霍爾布魯克
• 申請（專利權）人: 尤尼利弗公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/04;G01N33/02
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 林玉貞

本發明是關于微生物培養和檢測的設備和方法，更具體地說是適用于活動細菌，例如沙門氏菌、凱普勒菌屬、李司忒氏菌屬、弧菌屬、氣單胞菌屬、埃希氏桿菌屬的菌種、菌株和血清型的裝置和方法。

上述這些活動細菌，由于其對人和動物的病原特性，在食品衛生，環境衛生和污染的監視，以及用作臨床試樣等方面，是特別重要的主體。

現有的方法，特別是對在食品試樣中沙門氏菌污染所用的檢測方法，既耗時又費力。

一種用于沙門氏細菌污染（如在食品試樣中）的標準的檢測方法，包括如下步驟：

（a）：在225毫升含有如細菌學胨的“預濃縮”或“復蘇”（resuscitation）介質中分散25克食品或其它物料的試樣，培育多達一天的時間（如在37℃下，培育18-24小時）;

（b）：把原始培養液再培養在每一種由一種或多種不同形式（例如二種）構成的“選擇性濃縮介質”中，以抑制與存在的沙門氏菌有關的其它微生物的生長，通過培育使這些濃縮培養液生長，以得到可以顯示的沙門氏菌（如果存在）;（最少的可顯示的菌的含量可以在很大范圍內變化，若不存在其它污染，則為大約每毫升1000個微生物，在有其它微生物嚴重污染的情況下，每毫升大約有一百萬以上的微生物或者更多）;

（c）：用所得的濃縮培養液，在一組選擇性不同的固體生長介質上接種，通常在瓊脂上接種，在皿上識別出沙門氏菌落（如果在初始的試樣中存在）;

（d）：對任意臨時識別為沙門氏菌的菌落至少進行生物化學和/或免疫學（凝集）檢測，以進一步證實或推翻這種識別。

整個過程大約一周。

近來，發展了一種改進的免疫學的檢測方法，它可取代標準方法中的步驟（c）和（d），稍微縮短了整個時間。

現有技術中還有一種辦法，即通過一個選擇性的移動系統用以隔絕沙門氏菌（PFStuart和HPivnick（1965），應用微生物學13（3）PP365-372），這種技術是利用u形管中“半固體”膠體介質，在u形管的一側，接種后將得到細菌，在其另一側，在半固體膠體的表面用一取自預濃縮培養液的樣品作為接種體。

另一種依據待測微生物活動性的技術如美國專利USP????4563418（生物控制有限公司）所述，該專利描述了一種“活動免疫固定方法”（motilityimmunoimmobilisation），用來檢測活動的微生物，如沙門氏菌。它還公開了一移動容器，其每端開孔，一個蓋子蓋在每端的開孔上，它包含一種膠凝的移動介質。采用這種系統時，在（容器）一端通過置入抗血清來固定與膠凝介質相接觸的沙門氏菌，在其另一端，置入含有趨藥性誘引劑（如L-絲氨酸）的選擇性濃縮介質和微生物接種體，所說的接種體來自先有的與膠體介質相接觸的選擇性濃縮培養液。培育之后陽性結果由靠近抗血清加入處的管子那端的一部分固定細菌來指示。

另外有關（包括移動濃縮的內容）沙門氏菌的檢測的回顧與說明最近已經出版，可見JM????De????Smedt，RF????Bolderdijk，HFRappld和DLautenschlaeger（1986）《食品保護》，卷49（7）PP510-514，其中提到，轉移由預濃縮培養液得到的接種體，以便在含有Rappaport-Vassiliadis肉湯的半固體瓊脂表面上形成斑點：經過24小時培育之后，在遷移后的細菌顯現生長的區域邊緣采集試樣，進行再培養，以檢測沙門氏菌的存在。

美國專利USP3704204（Armour和CO）描述了一用于沙門氏菌的快速檢測法，舉例為：用一個位于介質表面上方大約1吋或半吋的用乙酸鉛飽和的棉墩，在營養基中培育肉骨樣品，營養基中含有選擇性抑制劑，如膽汁鹽，脫氧膽酸鹽，氧化鋰和吖啶衍生物（吖啶黃素）：在經過24小時培育之后，棉墩發黑，這視為陽性（可疑）結果。據報導，采用這種方法，盡管沒有錯誤的陰性反應，但有許多錯的陽性反應。

雖經這些努力，但如何以簡便的方式，縮短活動細菌檢測所需的時間，特別是在較早的培養階段上，仍存在著問題。

本發明的目的之一，就是為活動細菌提供檢測裝置和方法，它能使由單個容器內的樣品培養液所獲得的檢測結果，具有較高的可靠性。

本發明的另一個目的，是提供簡便的活動細菌選擇性濃縮培養和檢測的裝置和方法，以簡化和/或減少操作者對樣品和培養液的處理。

一方面，本發明提供了一種選擇性培養活動細菌的方法，包括的步驟是：

（a）：制備一種懷疑含有活動細菌的物料的細菌學培育樣品;