[其他]新的α-1，6-葡萄糖苷酶及其生產(chǎn)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 87106597
• 申請日: 1987-09-26
• 公開（公告）號: CN87106597A
• 公開（公告）日: 1988-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 中井國治;塩崎正義;辻廣二;森茂治;廣瀨進(jìn);橫井信正;大矢隆一
• 申請（專利權(quán)）人: 天野制藥株式會社
• 主分類號: C12N9/44
• 分類號: C12N9/44;C12N1/20;//
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利代理部
• 代理人: 顧柏棣,李瑛

本發(fā)明涉及一種新的α-1，6-葡萄糖苷酶及其生產(chǎn)方法，尤其涉及一種新的芽孢桿菌（Bacillus????sectorramus），該菌能在最適pH5.0至5.5、最適溫度55℃條件下經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生α-1，6-葡萄糖苷酶，另外還涉及一個(gè)生產(chǎn)上述新的α-1，6-葡萄糖苷酶的生產(chǎn)過程，其中包括培養(yǎng)上述菌種并收集α-1，6-葡萄糖苷酶。

α-1，6-葡萄糖苷酶具有對淀粉類中的α-1，6-葡萄糖苷鍵發(fā)生作用以產(chǎn)生直鏈淀粉的能力，并且廣泛用于制糖工業(yè)，生產(chǎn)麥芽糖、葡萄糖和高果糖玉米糖漿（HFCS）。

α-1，6-葡萄糖苷酶長期以來發(fā)現(xiàn)于高等植物和微生物酵母體中，但近期有報(bào)道許多細(xì)菌可以產(chǎn)生這種酶，例如：產(chǎn)氣桿菌（Aerobactor????aerogenes），中間埃希氏菌（Escherichia????intermedia），假單孢菌（Pseudomonas????amyloderamosa），緩癥鏈球菌（Sterptococcus????mites），噬纖維菌（Cytophage），鏈霉菌屬（Sterptomyces）和α-葉紅呋喃菌屬（Flavochromogenes）等。

另外，在產(chǎn)生α-1，6-葡萄糖苷酶的芽孢桿菌種中，已知的種類有蠟狀芽孢桿菌（Bacillus????cereus）（IFO????300），芽孢桿菌（Bacillus????fermus）（IFO????300），芽孢桿菌（Bacillus????acidopullulyticus）等。

大多數(shù)已知的α-1，6-葡萄糖苷酶具有中性或弱堿性的最適pH值，不適于在糖化工業(yè)中使用，工業(yè)上的糖化作用一般在酸性條件下進(jìn)行。

已知由假單孢菌（Pseudomonus????amyloderamora），芽孢桿菌（Bacillus????acidopullulyticus）等產(chǎn)生的α-1，6-葡萄糖苷酶具有酸性最適pH值，但是由于抗溫性差，前者是不能實(shí)際使用的;同時(shí)后者菌體培養(yǎng)時(shí)間需長達(dá)60～70小時(shí)，所以是不經(jīng)濟(jì)的。

因此，本發(fā)明人試圖尋找具備抗溫性、酸性的最適pH值和高的α-1，6-葡萄糖苷酶產(chǎn)量的微生物。

在發(fā)現(xiàn)一種新的芽孢桿菌的基礎(chǔ)上，本發(fā)明人完成了本發(fā)明。這是一由本發(fā)明人新近在土壤微生物中發(fā)現(xiàn)的芽孢桿菌（Bacillus），它經(jīng)過10～15小時(shí)短時(shí)間的培養(yǎng)再收集其產(chǎn)物能夠得到大量的α-1，6-葡萄糖苷酶。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種生產(chǎn)α-1，6-葡萄糖苷酶的方法，其中包括培養(yǎng)能產(chǎn)生α-1，6-葡萄糖苷酶的芽孢桿菌（Bacillus????sectorramus）使其在培養(yǎng)條件下產(chǎn)生α-1，6-葡萄糖苷酶，然后收集所述的α-1，6-葡萄糖苷酶，它具有如下酶化學(xué)性質(zhì)：

（1）反應(yīng)：該酶對α-1，6-葡萄糖苷酶鍵起作用并產(chǎn)生線性淀粉;

（2）底物專一性：該酶對多糖具有下列相對活性：

多糖????相對活性（%）

支鏈淀粉????100

可溶性玉米淀粉????13

可溶性淀粉????6.7

牡蠣糖元????1.7

野兔糖元????2.6

玉米淀粉????3.8

馬玲薯淀粉????4.0

（3）米氏常數(shù)值（Km）和對支鏈淀粉的Vmax∶該酶的Km值為0.14mg/ml，Vmax值為70.0μmol/min/mg蛋白質(zhì);

（4）最適pH：5.0～5.5

（5）pH穩(wěn)定性：該酶在pH范圍4.5～6.0、溫度40℃條件下可穩(wěn)定30分鐘;在pH值5.0～6.0，溫度50℃也可穩(wěn)定30分鐘;

（6）最適溫度：約5.5℃;

（7）熱穩(wěn)定性：該酶在pH值為4.5條件下，分別以不同溫度處置30分鐘所得結(jié)果表明在40℃時(shí)，該酶仍保留其初始活性的80%;60℃時(shí)活性則為10%;

（8）抑制劑的影響作用：對氯汞苯甲酸或十二烷基硫酸鈉至少可抑制該酶活性的70%，但不受鄰-菲咯啉或氰鐵酸鉀的抑制;

（9）金屬鹽類的影響作用：該酶幾乎不受Ni²⁺、Ba²⁺、Zn²⁺、Cd²⁺或Mn²⁺的影響，受Fe³⁺的抑制，并且Hg²⁺和Ag²⁺可使其失活;還有

（10）分子量：約95，500（用SDS電泳法測得）。