[其他]利用不溶性免疫復合物提高抗體的生產

無效

• 申請號: 87105716
• 申請日: 1987-06-19
• 公開（公告）號: CN87105716A
• 公開（公告）日: 1988-06-08
• 發明（設計）人: 阿爾頓·C·摩根;克利夫·S·伍德豪斯;羅伯特·F·麥克英特爾
• 申請（專利權）人: 尼奧爾克斯公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N15/00;A61K39/395
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 顧柏棣

本申請是1986年6月20日遞交的876，828號美國專利申請的部分后繼申請。

本發明涉及一種利用不溶性免疫復合物提高抗各種抗原的抗體產量的方法。純化的抗原、含其它污染抗原的富集抗原以及不均一抗原混合物均可作為抗原的來源。多克隆單特異性抗體、多克隆多特異性抗體以及單克隆抗體均可與抗原及蛋白A-Sepharose結合，以形成不能溶解的免疫復合物。以這類復合物之抗原成分誘導產生的抗體不僅效率高，而且在某些情況下，還具有超過原始抗血清或單克隆抗體的改善了的特異性。

現有技術中已使用了各種各樣的方案來生產抗糖蛋白、抗糖脂及抗腫瘤相關抗原的單克隆和多克隆抗體。例如可利用完整細胞這一高免疫原性載體生產單克隆抗體。然而，這種方法在生產有用抗體中卻存在著效率低的問題。此外，純化的可溶性抗原在小鼠體內正如同一免疫原在兔和羊等其它種動物體內相反，其免疫原性是很差的。

某種抗原以不溶形式存在即可能改善可溶性抗原制劑在小鼠體內的免疫原性。例如，某些情況下對癌胚抗原作明礬淀淀即可能提高免疫原性。但為了達到預期的抗體生產水平，常常要使用佐劑。按傳統方法，業已使用佐劑如弗氏佐劑與可溶性抗原制劑混合用于免疫兔或羊。然而佐劑往往在小鼠內無效;盡管可以產生可測滴度的抗體，但抗原特異性雜交瘤的產率卻很低。本發明公開了一種生產抗原特異性雜交瘤有效的不能溶解的免疫原。

使用現有技術中所描述的可溶性免疫原制劑，通常還須為分離足夠量的純化抗原付出大量的勞動。大多數用可溶性抗原進行免疫的方法中，所用純化抗原量為50-100μg。鑒于大多數細胞表面或胞漿抗原都只是以很小的量產生的，所以為制得這一劑量的抗原便須作大量的生物化學純化工作。本發明的一個方面即在于提供一種由不均一抗原混合物中富集某給定抗原的方法，從而減少了純化工作。本文中所用的“富集”一詞是指提高有用抗原或抗體的濃度。

本發明的另一個方面是涉及生產抗同一抗原上抗原決定基的單克隆抗體，但所說的抗原決定基並不同于由用于制備免疫原的抗體鑒定的抗原決定基。前已證明了對這些抗多抗原決定基之抗體的需要。例如，業已發現在一種糖蛋白分子內可存在有一個以上的抗原決定基，而且在糖蛋白分子的不同亞群上可具有抗原決定基的不同形式的結合。因此，並不是所有抗原決定基都一定在所有糖蛋白分子上和/或在一給定的組織內有著同樣的分布。特別是本發明人發現，人黑素瘤相關抗原系統中抗原異質性的程度取決于被單克隆抗體識別的抗原決定基（Morgan等，Mol.Immunology，待出版）。一種識別分散于多數黑素瘤糖蛋白分子上之抗原決定基的單克隆抗體（MAb），比識別僅存在于糖蛋白分子亞群上之抗原決定基的MAb具有較小的抗原異質性。使用抗癌胚抗原（CEA）的單克隆抗體，可將CEA制劑再分為攜帶獨特抗原決定基之分子的若干組群。這一點也已用抗Ⅱ類組織相容性抗原（HLA-DR抗原）的單克隆抗體證實。因此，生產抗已知抗原上特異抗原決定基的獨特抗體，可使單克隆抗體的治療應用-包括向靶細胞釋放放射性同位素、藥物或毒素得以最佳化。

如抗原純化一樣，生產抗已知抗原之特異性抗原決定基的單克隆抗體的現有工藝方法也是很復雜的。現有工藝方法學是使用經一系列步驟分離的可溶性純化抗原進行免疫，其包括生產大量的已知單克隆抗體、純化該抗體、將該抗體接到某種不溶性基質（如Sepharose）上使之成為不溶的，而且典型地還要以至少一種其它親合分離方法（如凝集素親合層析法、離子交換層析法）與單克隆抗體親合層析法結合使用，以自不均一抗原混合物中提純抗原等步驟。這種方法不僅費用高、花費的時間長，而且需要用大量細胞作為不純抗原的來源。此外，在分離出來后，這種可溶性抗原制劑在小鼠體內的免疫原性亦很差。為此，本領域內需要找到一種能更為有效地並花費較少時間的生產這類單克隆抗體的方法，所說的這些抗體是針對抗原上由已有單克隆抗體所識別之抗原決定基以外的抗原決定基的。依據本發明的方法，所用抗原來源無須純化，而且尚可提高免疫原性。

本領域中還要求有一種能生產抗那些存在其多克隆抗血清之抗原的單克隆抗體的方法。如果存在有這些多克隆抗血清，既使量很小、滴度很低或者是以多特異性形式（即含有不同特異性的許多抗體）存在，亦可以將其用于本發明生產單克隆抗體。但在許多情況下，這些抗血清的量是有限的，不足以用來作抗體親合層析，因此在使用可溶性純化抗原的免疫方法中是沒有用的。本發明之免疫方法的另一個好處是可制得不同于用在免疫中之多克隆抗血清的、有著不同特異性的單克隆抗體。