[其他]植物組織暴露培養法及設備

無效

• 申請號: 87104410
• 申請日: 1987-06-29
• 公開（公告）號: CN87104410A
• 公開（公告）日: 1988-02-03
• 發明（設計）人: 劉思九;戴春玲;沈昕
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12M1/00
• 代理公司: 北京林業大學專利事務所
• 代理人: 陳福江,劉守國

本發明屬于生物技術和組織培養領域C12N05、C12M01。

組織培養技術從它的誕生到現在都是把培養物用棉花塞子或瓶蓋、紙等封口材料，封裝在滅菌的培養容器內部進行培養。自1960年Morel第一次用組培方法大量繁殖蘭花以來，培養容器的形狀和培養基成分有了各種改進，但培養中的試管植物不能暴露于容器外部的做法，一直是組培技術不言而喻的法則。

反映現有組培技術及其改進情況的科學文獻和專利文獻有：①裘文達（1986）園藝植物組織培養，上海科技出版社。②傅婉華、王玉琴（中科院上海植物生理研究所）1987：植物組織培養技術的兩點改進、植物生理學通訊，1987年，第1期、P36。③歐洲專利EP-183-973A20。④歐洲專利EP-111-664-A24⑤英國專利GB2089837。⑥GB2112-413A。

在現有組培技術中，由于棉花塞子等封口材料只容許容器內外做有限的氣體交換，容器內部濕度較高，積累少量有害氣體，缺乏自然光直射和不通風等不利條件的影響，試管苗的素質十分嬌弱，不能適應外界環境，移栽成活率很低。所以傳統組培技術必須有個鍛煉試管苗的過程，使其逐步適應外界環境。這個過程包括加蓋玻璃罩，定期彌霧，以保持空氣濕度，定期和逐步增加通風，和較長時間的遮蔭降溫等步驟。也就是說，出試管以后比在試管內階段更加費工費錢。大多數植物種類即使經過上述練苗過程，也還有相當的死苗率。所有上述問題都是現有組培技術固有的缺點，它提高了組培的成本，限制了快繁工業的發展。

本發明的目的就是為了克服這個固有缺點，改善試管苗的素質和適應性，減少練苗過程，提高移栽成活率，并最終降低成本。

本發明的特征，在于使脫毒苗等試管植物的莖葉部分，在培養過程中逐步暴露于容器外的自然環境中并繼續分化生長。由于容器外部的光照、濕度等條件更有利于鍛煉試管苗，所以暴露培養法試管植物的素質接近常規繁殖的幼苗，移栽后適應性和成活率都顯著提高，練苗過程簡化，成本也相應降低。為了使試管植物在培養過程中從封閉狀態中解放出來，本發明設計了專用設備-暴露培養容器〔附圖〕和新工藝-暴露培養法：培養基1和其上接種的脫毒苗等各種試管植物2或播種的無菌種子3等，不用傳統的封口材料封閉起來，而是用滅菌的粉末物質4覆蓋起來（覆蓋厚度0.3～4.5CM）。這種粉末為無毒的礦質（如蛭石等）或有機材料如樹脂等制成，顆粒直徑在0.05～0.3mm之間，表面加熱浸沾一層疏水性物質（如石臘），以消除顆粒之間的毛細管作用，阻止水分和營養成分外滲，另外粉末也能擋住微生物孢子深入下層，因而可以有效地保護培養基不受污染。另一方面，這層覆蓋粉末并不阻擋試管植物莖葉自由生長和鉆出5。也不阻擋氧氣的滲入和有害氣體如乙烯等的逸出。培養基1及其覆蓋的粉末層4是由紗布6和玻璃圈7或代用品組成的環形多孔片狀箅子，架在容器內壁的三個突起8上。紗布包裹玻璃圈之后，留一紗布條9浸入容器底部的水或培養液10中，以補充培養基由于莖葉蒸騰所消耗的水分，必要時可從加液口11補加或更換培養液。這個加液口用鋁箔或其他封口材料包好。瓊脂培養基必須在它將要冷凝時在超凈臺中倒在紗布箅子上，但它可用天然蛭石（顆粒大小同覆蓋粉末）代替，在這種情況下，容器底部的水就改為培養液。這種做法的另一個好處是可在必要時從加液口更換培養液，或調節PH值或激素比例，而達到一次生根的目的。接種和覆蓋粉末后，即可放在有適當溫度的溫室中培養。

暴露培養容器可由玻璃、陶瓷、塑料或其它可用高溫或輻射方法滅菌的材料制成，其橫斷面形狀可制成園形、方形或其它幾何圖形，其橫截面積在0.001～1.50M²之間，可依植物種類和生產需要而定（一般實驗室可用直徑4～15CM的）。此容器可單獨制做使用，也可多個組合制做使用。

上述組織培養新工藝及新容器，可用于多種不同類型植物的組織培養和快速繁殖，適用于多種器官和組織的分化、增殖、誘導生根和無菌播種，如莖尖、腋芽、莖段、葉片、葉柄、花、果、塊莖、鱗莖、球莖、幼胚以及它們的愈傷組織發生的不定芽、叢生芽和胚狀體。

實施例1.矮牽牛（Petunia????hybrida）一代雜種（美國引進）白色，粉色（重瓣）和紫色（單瓣）品種各種外植體的分化、增殖和生根。

瓊脂培養基成分：MS附加6BA0.5mg/l，瓊脂0.8%，蔗糖3%，PH5.6，誘導生根時用1/2MS附加NAA0.2mg/l和IBA0.1mg/l。