[發(fā)明專利]聚脫氧核苷酸的制備工藝

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 87103688.6
• 申請(qǐng)日: 1987-04-17
• 公開（公告）號(hào): CN1018650B
• 公開（公告）日: 1992-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吉安弗朗科·菲得利;吉尤薩普·迪亞曼蒂尼;馬里薩·曼托瓦尼;吉尤薩普·普里諾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 克利諾斯農(nóng)場生物工業(yè)聯(lián)合股票公司
• 主分類號(hào): C07H21/04
• 分類號(hào): C07H21/04;C07H1/08
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利代理部
• 代理人: 李瑛

1、一種由原核酸溶液生產(chǎn)聚脫氧核苷酸Defibrotide的方法，上述溶液至少基本上沒有多糖和蛋白質(zhì)，上述方法包括：

(1)將堿金屬的水溶性鹽加入到原核酸的不溶性鹽懸浮液中以溶解該核酸，除去所得懸浮液中不溶解的陽離子，連續(xù)地加入水溶性鹽直到獲得至少1摩爾原核酸的鹽溶液。通過原核酸的穩(wěn)定聚合形成高聚合切口的聚脫氧核苷酸，如果需要，溶液將調(diào)節(jié)到至少1摩爾預(yù)定值離子力并調(diào)節(jié)溶液pH值，直到達(dá)到最大可逆增色性為止：

(2)將所得到的溶液加熱至上述聚脫氧核苷酸的解聚溫度，從而解聚聚脫氧核苷酸直到溶液的可逆增色性在h=15±5數(shù)值為止，h值由在天然DNA的百分比測量，并維持溶液在解聚溫度直到獲得上述可逆增色值；

(3)用冷卻溶液的方法停止解聚反應(yīng)，調(diào)節(jié)解聚溶液pH值到大于7使雙絲碎片中氫鍵斷裂，以形成聚脫氧核苷酸的單絲碎片；以及

(4)將所得到的溶液加熱到至少比解聚反應(yīng)溫度高5℃的溫度及比解聚反應(yīng)更高的pH值以穩(wěn)定得到的聚脫氧核苷酸的單絲碎片以防止氫鍵重新形成。

2、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中上述原核酸溶液由器官組織和哺乳動(dòng)物細(xì)胞獲得。

3、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中連續(xù)加入水溶性鹽直到上述原核酸的鹽溶液至少是3摩爾。

4、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中堿金屬的水溶性鹽選自鹵化物和乙酸鹽。

5、根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所說鹽為氯化鈉。

6、根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中所說鹽是3摩爾氯化鈉溶液。

7、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中通過連續(xù)補(bǔ)充鹽水溶液，用切向流過濾膜在恒容條件分離過濾，以除去不溶性陽離子。

8、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中上述過濾膜具有不高于100000的分子限定范圍。

9、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中用與可溶解鹽的陰離子相當(dāng)?shù)乃醽碚{(diào)節(jié)步驟1的pH值，該可溶解鹽用于得到預(yù)定離子力的鹽溶液。

10、根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所說的酸是鹽酸。

11、根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中通過加入鹽酸使得溶液中的氫離子濃度與pH4-5相對(duì)應(yīng)。

12、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在步驟1用1摩爾濃度的乙酸鹽緩沖液達(dá)到與體系的最大可逆增色值相應(yīng)的最終期望pH值。

13、根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中將穩(wěn)定加熱單絲碎片得到的溶液過濾并加入醇溶劑使最后產(chǎn)物沉淀。

14、根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中上述溶劑是乙醇。

15、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中上述原核酸的鹽溶液是通過溶胞產(chǎn)物研磨、加熱蛋白水解的消化作用、過濾并濃縮制備，接著加入能夠使磷酸鹽沉淀的陽離子鹽并在恒容條件下過濾沉淀懸浮液。

16、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中蛋白水解的溶胞產(chǎn)物過濾是在切向流過濾膜上進(jìn)行的。

17、根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中上述過濾膜的分子選擇范圍為50，000-100，000。

18、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中用切向流過濾膜進(jìn)行恒容過濾并連續(xù)補(bǔ)充水。

19、根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中所說過濾膜的孔徑不大于0.45u。

20、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中原料選自羊、豬、馬和牛的肺、腸、肝及粘膜。

21、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中原料選自白小體或其培養(yǎng)物的剩余物，精子、精母細(xì)胞或原始哺乳動(dòng)物的細(xì)胞。

22、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中原料是生產(chǎn)肝素，蛋白溶胞產(chǎn)物或器官提取物而加工動(dòng)物器官或組織所得到的母液。

23、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中步驟2的解聚反應(yīng)是在大約70到75℃的溫度下進(jìn)行的。

24、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中調(diào)節(jié)該溶液的pH值高于8。

25、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中pH值用加入堿金屬的氫氧化物來調(diào)節(jié)。

26、根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中上述堿金屬氫氧化物是氫氧化鈉。