[其他]植物組織多色一步整染技術(shù)及其專用組合染劑

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 87101075
• 申請(qǐng)日: 1987-06-29
• 公開（公告）號(hào): CN87101075A
• 公開（公告）日: 1988-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣俊輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蔣俊輝
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28
• 代理公司: 華東化工學(xué)院專利事務(wù)所
• 代理人: 盛志范

本發(fā)明屬于植物切片的顯微染色技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種植物組織的多色一步整染技術(shù)，還涉及一類與多色一步整染技術(shù)相適應(yīng)的組合染劑。

目前國(guó)內(nèi)制作植物組織切片一直沿用常規(guī)石蠟法（簡(jiǎn)稱常規(guī)法），其制作過(guò)程比較復(fù)雜，通常包括：植物組織固定、沖洗、脫水、透明、埋蠟、切片、貼片、脫蠟、洗滌、染色（1）、分色（1）、染色（2）、分色（2）、脫水、透明、再經(jīng)封膠成制品。整個(gè)制片過(guò)程不僅十分繁瑣，周期很長(zhǎng)，而且要獲得一張滿意的植物組織切片，非得有一位已經(jīng)積累了豐富經(jīng)驗(yàn)的技師熟練地掌握整個(gè)制片過(guò)程，特別是染色、分色的火候全憑經(jīng)驗(yàn)，稍有差錯(cuò)，全功盡棄，即使如此，由于切片的染色是一片一片地進(jìn)行的，因此重復(fù)獲得相同色效的植物組織切片是不容易的。為此，Lhotka，J.T.等人研究了植物組織的整染技術(shù)〔Stain，Technol.（1947），NO22，P139;Stain????Technol.，（1949），NO24，P127.〕，Tolbert，N.E.等人又研究了（用番紅+天青藍(lán)兩種堿性染料混合液）兩重染技術(shù)（或稱二色一步整染技術(shù)），試圖通過(guò)改進(jìn)染色技術(shù)制取可重復(fù)的植物組織切片，但是染色過(guò)程所需時(shí)間很長(zhǎng)（需3～4天），而且僅能染少數(shù)的植物根、莖尖等幼嫩組織，多數(shù)植物由于染劑滲透不勻，色澤差異較大，因而實(shí)用價(jià)值不大。

中國(guó)的生物學(xué)者容壽柏，借助超聲波的作用，進(jìn)一步開拓了植物切片的兩色一步整染技術(shù)〔植物生理學(xué)通訊，（1981），NO4，P46.〕，其中以叔丁醇為溶劑，配制了番紅十固綠的混合染劑，在50℃下應(yīng)用于植物組織埋蠟切片前的整染，有效地縮短了染色時(shí)間，這是整染技術(shù)的一大進(jìn)步，可惜的是由于沒(méi)有擺脫傳統(tǒng)的染劑范疇，因而適用的范圍非常有限，染色時(shí)還需要加熱保溫，切片的色彩還不夠豐富（只能做到二色），此外，由于對(duì)染料的質(zhì)量要求高，因而受到使用上的限制，目前未見(jiàn)工業(yè)化應(yīng)用。

本發(fā)明的目的在于克服已有技術(shù)的缺點(diǎn)，尋找一組能廣泛適用于各種植物組織染色的“組合染劑”，以實(shí)現(xiàn)植物組織在埋蠟切片前一步整體多重染色，可以是一步二重染，一步三重染、一步四重染，并力求簡(jiǎn)化制作切片的工藝，縮短生產(chǎn)周期，以適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)的需要。

本發(fā)明的構(gòu)思是這樣的：借助組合染劑的快速滲透和各自擇染的作用，實(shí)現(xiàn)植物組織在埋蠟、切片（或者脫水、透明）前的一步整體多重染色，所用的組合染劑必須易為植物組織所分色，以達(dá)到切片色彩鮮艷、層次清晰的目的，為此必須打破傳統(tǒng)的植物切片染色用染料的范疇。

本發(fā)明的內(nèi)容：首先配制組合染劑。

組合染劑是一種由溶劑與混合染料配成的溶液，它在植物組織中能快速滲透。其中溶劑可以是水，也可以是酒精，但最好為0～50%的酒精水溶液。其中混合染料是由活性染料、酸性染料和直接染料組成的混合物，它們之間的比例視染色對(duì)象的不同而變化（一般應(yīng)視具體植物組織的不同，以調(diào)到最佳色效為止）。適宜的配比范圍為：

活性染料∶酸性染料∶直接染料＝0～3∶0～2∶0～2。

然后將經(jīng)固定、沖洗的植物組織切塊（厚2～5毫米或者按照常規(guī)法植物固定時(shí)的尺寸）10～40塊浸入上述組合染劑中，在室溫下浸染（增加溫度，有利于加快浸染速度，縮短浸染時(shí)間，但帶來(lái)能耗的增加）。染劑的濃度視植物組織的性質(zhì)、大小而定，可以在1～6%（重量比）范圍內(nèi)選取。染劑的體積視植物組織的大小、多少而定，一般至少以浸染所需浸染的植物切塊為宜。浸染的時(shí)間為12～72小時(shí)，但以24小時(shí)左右為佳。這里給出的24小時(shí)以上的時(shí)間，僅僅為了說(shuō)明浸染過(guò)程的控制要求不高而已，而常規(guī)法稍有差錯(cuò)，就會(huì)導(dǎo)致切片的報(bào)廢。

最后，經(jīng)浸染后的植物組織，再經(jīng)脫水、透明、埋蠟、切片、貼片、脫蠟、封膠等處理（均同傳統(tǒng)的常規(guī)法），制成植物切片。

本發(fā)明所用的活性染料，可視植物組織不同和染色要求不同進(jìn)行選擇，常用的有：

活性紅????K-2BP、活性黃????KD-3G、活性艷紅????X-2B、

活性艷藍(lán)????X-BR、活性艷紅????X-B、活性翠藍(lán)????K-P4G、

活性黃????X-GN、活性翠藍(lán)????K-GL、活性艷橙????X-GN

活性艷藍(lán)????K-GR、活性艷紅????X-7B、活性艷紅????K-2G

活性嫩黃????X-6G、活性嫩黃????K-6G等

（K-表示熱固型活性染料，X-表示普通型活性染料）。

本發(fā)明所用的酸性染料，亦可視植物組織不同和染色要求的不同進(jìn)行選取，常用的有：

酸性紅G、酸性紅B、酸性大紅GR、

酸性紅3B、酸性嫩黃2G、酸性湖藍(lán)A等。