[其他]氰化物水解酶的制備

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 87100788
• 申請日: 1987-02-19
• 公開（公告）號: CN87100788A
• 公開（公告）日: 1987-09-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肯尼思·雷蒙德·理查森;彼得·莫里斯·克拉克
• 申請（專利權(quán)）人: 帝國化學(xué)工業(yè)公司
• 主分類號: C12N9/78
• 分類號: C12N9/78;C02F1/58;//;C12R177)
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 楊剛,曹恒興

本發(fā)明涉及氰化物水解酶的制備方法。

含有氰化物水解酶EC????4.2.1.66號（或者稱為甲酰胺水解酶）的某種真菌，能夠把氰化物降解為甲酰胺（見生物化學(xué)和生物物理學(xué)雜志151卷，468～474頁，（1972年）以及植物病理學(xué)67卷，1001～1006頁（1977年）），可參閱下述日本發(fā)酵技術(shù)雜志：45卷，7期，630～636頁（1967年）;46卷，10期，807～813頁（1968年）;47卷，10期，639～643頁和644～650頁（1969年）以及48卷，5期，277～282頁和253～290頁（1970年）。一般認(rèn)為這種真菌適用于微生物處理含氰廢液（見歐洲專利61249號），為適合此種目的，最好含氰化物水解酶的真菌長時間后仍然穩(wěn)定，而且具有高活性。

根據(jù)本發(fā)明，提供一種制備氰化物水解酶的方法，包括步驟（A）在溫度28～34℃，pH值4.5～7.5以及稀釋率不大于0.11/小時的條件下，在含碳和適當(dāng)無機(jī)營養(yǎng)物源的液體培養(yǎng)中連續(xù)培養(yǎng)需氧微生物菌株。同時，在發(fā)酵情況下，連續(xù)地把氰離子和/或氰化氫和/或產(chǎn)生氰離子和/或氰化氫的化合物供給當(dāng)量濃度至少為15毫克分子的培養(yǎng)物（完全培養(yǎng)基中的氰離子和/或氰化氫供給培養(yǎng)物）;步驟（B）從培養(yǎng)物回收含氰化物水解酶的細(xì)胞。

一種處理含氰化物材料以降解其中氰化物的方法，其中，該材料用氰化物水解酶或包含氰化物水解酶的組合物處理，特征為氰化物水解酶是由本發(fā)明方法制備。該方法也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。

在培養(yǎng)條件下，加到培養(yǎng)物的氰離子變成氰化氫。

雖然也可使用適宜的菌株，但最好的微生物菌株是真菌菌株。可用于本發(fā)明方法的真菌包括Stemphylium????loti，如ATCC????11718;陸生小齒菌;如CBS????231.53;從加拿大農(nóng)業(yè)部渥太華培養(yǎng)中心得到的念珠形鐮刀菌，如3104，SA，49a號，也可是儲存號CBS161.82;Helminthosporium????Sorghicola，或稱作Drechslera????Sorghicola，如CBS????249.49;periconiacircinata，如CBS263.37;以及Glomerella????tucamanensis，CBS????132.37（ATCC????NO.指的是美國馬里蘭州20852，羅克維爾市12301????Park????Lawn????Drive美國標(biāo)準(zhǔn)菌庫的登記號，CBS????NO.指的是荷蘭巴恩真菌菌種收藏中心的登記號）。還可使用其它真菌以及在文獻(xiàn)中所介紹的產(chǎn)生酶的真菌，包括Collectotrichum????graminicola，高梁膠尾孢菌，大斑病長蠕孢菌，玉蜀黍?qū)Ｈ滏呔忌L蠕孢菌，維多利亞長蠕孢菌和H.Phomna。

較好的真菌菌株是鐮刀菌，尤其是磚紅鐮刀菌株CMI????300533，1986年2月3日儲存在英國Ferry????Lane，Kew，Richmond，Surrey，Tw9????3AF，英聯(lián)邦真菌研究所;并由此得到變種和突變體。較好的真菌菌株CMI????300533對小麥不致病原，具有下列形態(tài)特征：

培養(yǎng)基（1），馬鈴薯蔗糖瓊脂（PSA）

250克洗凈并切成小片的馬鈴薯放在15磅/吋²壓力的蒸煮器中15分，煮成物用兩層細(xì)棉布壓榨，把2%葡萄糖和2%瓊脂加到混濁的濾液，對培養(yǎng)基進(jìn)行高壓滅菌及分配。

培養(yǎng)基（2），Czapek-Dox

（改進(jìn)的）

瓊脂（Oxoid）（CDA）

“Oxoid”表示注冊商標(biāo)。

生長條件：25℃，幾星期。

生長率：分別為4.0厘米/3天3.0厘米/3天。

生長特征：柔毛狀白色氣中菌絲體的分散菌落。帶灰玖瑰色PSA培養(yǎng)基的斑點由深紅色趨向于黃色，在CDA上趨向有點淺色的，偶而產(chǎn)生深紅色色素，這尤其在老化時。1～2星期后，氣中菌絲體趨向于棕色并萎陷。然后菌落變得相當(dāng)粘稠，如形成分生孢子座，在PSA上的顏色由淡紅到棕色，在CDA上變成赭色。

不產(chǎn)生滲出液，并且形成的色素趨向于菌絲體顏色。

分生孢子：小分生孢子不是由這種真菌產(chǎn)生的，而由單個側(cè)向生長擔(dān)子梗或帶有短狀擔(dān)子梗的多分支分生孢子梗產(chǎn)生的。在較老的培養(yǎng)物中，分生孢子梗聚集成分生孢子座，特別在CDA上，分生孢子從鐮刀形變?yōu)閺澢忓N狀背腹形。在較新培養(yǎng)物中有3～5個通常為5個隔膜，孢子大小為25～50μ×2.5μ～4.0μ。