[其他]切向流親合超濾法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 87100660
• 申請(qǐng)日: 1987-01-10
• 公開（公告）號(hào): CN87100660A
• 公開（公告）日: 1988-01-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏仁長(zhǎng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 希莫索爾公司
• 主分類號(hào): B01D13/02
• 分類號(hào): B01D13/02
• 代理公司: 中國(guó)專利代理有限公司
• 代理人: 林玉貞,曹恒興

本發(fā)明是關(guān)于從生化大分子產(chǎn)品的混合物中和從含有或者生產(chǎn)這些生化大分子產(chǎn)品的介質(zhì)中回收和分離生化大分子產(chǎn)品的提純和分離方法。更確切地說(shuō)，是一種親合色譜和切向流超濾技術(shù)相結(jié)合、可用連續(xù)流或半連續(xù)流進(jìn)行操作的用于提純或分離生物分子的生化提純方法。該方法特別適用于提純血紅蛋白和化學(xué)改性血紅蛋白，但一般也廣泛適用于提純其它生物和生化產(chǎn)品。

現(xiàn)有技術(shù)中已有多種用于分離生物分子混合物的方法。其中最有效的方法之一是親合色譜法，一種基于生物分子與親合凝膠特定的選擇性結(jié)合而進(jìn)行分離的非常有效的分離方法。親合凝膠通常含有固定在凝膠載體上的結(jié)合配位體部分，很多具有良好分子間相互作用之特性的凝膠可以應(yīng)用于親合色譜法。

1986年6月26日公開的英國(guó)專利UK????8，615，675號(hào)以及在其它國(guó)家公開的各個(gè)相同專利介紹了血紅蛋白和經(jīng)過(guò)化學(xué)改性以改善載氧和循環(huán)性能的血紅蛋白衍生物的提純方法。這些方法采用親合色譜法并且基于天然（氧合）血紅蛋白與一定的親合凝膠多陰離子部分具有特殊的結(jié)合的原理。與以前的觀點(diǎn)相反，根據(jù)上述英國(guó)專利申請(qǐng)，象血紅蛋白一樣，（氧合）血紅蛋白可以用親合色譜法進(jìn)行分離。從實(shí)用的觀點(diǎn)出發(fā)這一發(fā)現(xiàn)是極其重要的，因?yàn)槌藝?yán)格控制實(shí)驗(yàn)室條件以外，要使血紅蛋白不轉(zhuǎn)化為（氧合）血紅蛋白事實(shí)上是不可能的。該方法適用正、負(fù)親合吸收方式。正親合吸收方式可用于從各種血紅蛋白來(lái)源如紅血球溶胞產(chǎn)物中提純血紅蛋白。當(dāng)象紅血球溶胞產(chǎn)物這樣的混合物，在適合于血紅蛋白與凝膠結(jié)合的條件下，通過(guò)親合凝膠時(shí)，血紅蛋白被滯留而混合物中的其它組分則被洗脫。然后從凝膠中洗脫滯留的血紅蛋白，即得到純凈的血紅蛋白。負(fù)親合吸收方式可用于從因改性反應(yīng)不完全性而剩下的未改性血紅蛋白的殘余物中分離改性血紅蛋白（即通過(guò)任何一種已知物質(zhì)的共價(jià)鍵附著使多陰離子結(jié)合位置進(jìn)行化學(xué)改性的血紅蛋白，目的是改善血紅蛋白溶液作為非細(xì)胞載氧流體的不理想特性。）用該方法，未改性血紅蛋白被親合凝膠滯留，而改性血紅蛋白，由于其多陰離子結(jié)合位置上明確地要由改性劑的共價(jià)鍵占有而不能與凝膠結(jié)合，被洗脫而成非滯留部分。上述的方法都可采用親合色譜柱，因它有較高的專一性，所以能生產(chǎn)出非常純的產(chǎn)品。但是親合色譜法較慢而且是很麻煩的間歇法。

另一種已知的分離方法是薄膜超濾，它是根據(jù)分子的大小分離化合物的。這種方法中最簡(jiǎn)單的方式是使溶液流過(guò)帶有確定大小孔的過(guò)濾器，溶液中尺寸太大不能通過(guò)孔的溶質(zhì)便與能夠通過(guò)孔的部分分離。但是，這種過(guò)濾方法由于未濾過(guò)的溶質(zhì)聚集在過(guò)濾器上，最后阻塞液體流過(guò)過(guò)濾器而受到限制。

最近，采用切向流超濾這種新方法（Gabler.F.R.ASM????News，vol.50????No.7（1984）P299）解決了這個(gè)問(wèn)題。用該方法，使溶液平行流過(guò)過(guò)濾膜，液體流不斷清洗過(guò)濾器表面從而防止非濾過(guò)溶質(zhì)阻塞。薄膜兩側(cè)的壓力差促使流體和過(guò)濾溶質(zhì)流過(guò)過(guò)濾器。這種方法可以按連續(xù)流的方式進(jìn)行操作，因?yàn)樵谌芤褐貜?fù)地流過(guò)膜的同時(shí)，穿過(guò)過(guò)濾器的流體則被連續(xù)地引出，進(jìn)入一個(gè)獨(dú)立的回路。但是，由于切向流超濾僅僅是根據(jù)分子的大小進(jìn)行分離，所以缺乏象用于親合色譜法那樣基于生物專一性進(jìn)行選擇性分離的能力。

本發(fā)明包括將切向流過(guò)濾用于連續(xù)流分離的方法。采用該方法，滯留部分與非滯留部分的分離是根據(jù)分子大小通過(guò)梯度過(guò)濾實(shí)現(xiàn)的，另外也采用了親合凝膠分離法，其中親合凝膠置于溶液或含有被分離組分的混合物中，做過(guò)濾器的上流側(cè)，由于凝膠顆粒比溶質(zhì)顆粒大得多，所以可以選擇既能使得未結(jié)合溶質(zhì)即沒有與凝膠結(jié)合的溶質(zhì)通過(guò)過(guò)濾器，同時(shí)又能防止凝膠顆粒和任何與凝膠結(jié)合的物質(zhì)通過(guò)的過(guò)濾器。

根據(jù)本發(fā)明，提供了一種用于從含有生物意義上的分子的混合物中分離生物分子的方法，它包括，在至少有一種大分子親合物質(zhì)存在的條件下，使所說(shuō)的混合物經(jīng)過(guò)切向流超濾，大分子親合物質(zhì)與所說(shuō)的生物分子進(jìn)行特定的結(jié)合從而防止它們?yōu)V過(guò)，而其它較小分子則被過(guò)濾除去。

根據(jù)本發(fā)明還提供了將第二種生物大分子和第一種生物大分子分離開來(lái)的方法，包括用親合凝膠處理含有所說(shuō)第一種和第二種生物大分子的混合物，親合凝膠只是選擇性地結(jié)合所說(shuō)第一和第二種大分子中的一種，而對(duì)另一種大分子不結(jié)合，隨后，使含有與親合凝膠結(jié)合的大分子的混合物進(jìn)行切向流超濾，從而在超濾的濾渣中得到與親合凝膠結(jié)合的大分子，在濾液中得到不與親合凝膠結(jié)合的大分子。

這里所說(shuō)的“生物大分子”是指分子量至少約為1000道爾頓的、天然生物或生化來(lái)源的或由生物或生化方法得到的分子。