[其他]多微電極電場誘導(dǎo)細(xì)胞雜交儀

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 86210174
• 申請日: 1986-12-09
• 公開（公告）號: CN86210174U
• 公開（公告）日: 1987-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張啟明;張國范;梁偉
• 申請（專利權(quán)）人: 遼寧省腫瘤研究所
• 主分類號: C21N15/00
• 分類號: C21N15/00
• 代理公司: 遼寧專利事務(wù)所
• 代理人: 王德榮,李宗津

本實(shí)用新型是一種細(xì)胞雜交儀，利用電場誘導(dǎo)使不同生物體細(xì)胞融合雜交。

細(xì)胞雜交技術(shù)是當(dāng)代前沿科學(xué)領(lǐng)域——生物工程學(xué)中細(xì)胞工程的重要組成部分，進(jìn)行動、植物種間或種內(nèi)不同體細(xì)胞的融合雜交，能產(chǎn)生具有新的基因特性的。有生活力的雜種細(xì)胞，這對生物育種，生產(chǎn)現(xiàn)代生活需要的多種生物產(chǎn)品的細(xì)胞系都具有極其重要的意義。例如：利用人或鼠的骨髓瘤細(xì)胞與致敏的人或鼠的B淋巴細(xì)胞融合雜交形成能合成抗胎甲球蛋抗癌胚抗原（CEA）、抗ABO血型、抗絨毛膜促性腺激素（HCG）等的單克隆抗體，在腫瘤診斷治療、醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)、計劃生育、藥學(xué)、生物制品等多種領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。目前體細(xì)胞的雜交多采用仙臺病毒、化學(xué)物質(zhì)等作促融劑，融合率很低。近年來出現(xiàn)了電誘導(dǎo)融合體細(xì)胞實(shí)現(xiàn)雜交的新技術(shù)，利用高頻交變電場使待融合的體細(xì)胞空間定向排隊，然后用電脈沖擊穿排隊的細(xì)胞之間的膜接觸區(qū)，使之實(shí)現(xiàn)融合。但目前國內(nèi)外使用的電誘導(dǎo)細(xì)胞雜交儀都只裝有一對電極，體細(xì)胞的空間定向排列相對較少，融合概率不是很大。另外電源在從建場排隊向擊穿切換時，在一個短暫的時間間隔內(nèi)，高頻交變電場消失，一部分已空間定向排列好的體細(xì)胞又恢復(fù)在液體中的無秩序狀態(tài)，使體細(xì)胞被擊穿融合的概率下降。

本實(shí)用新型提出一種電場誘導(dǎo)細(xì)胞雜交儀，該儀器采用多個微電極，擴(kuò)大了電場作用范圍，使體細(xì)胞的融合率提高。另外高頻電場直流脈沖儀中采用電容放電產(chǎn)生脈沖，切換時間短，擊穿時機(jī)可以手控選擇。

本實(shí)用新型由高頻電場直流脈沖儀和裝有電極的雜交池組成（圖1），本實(shí)用新型的一個主要特征是在雜交池內(nèi)有多個微電極，以擴(kuò)大電場作用范圍。雜交池內(nèi)的微電極的形狀可以做成多折角形狀（圖2、圖3）、這種微電極是由兩塊金屬薄片相互交錯組成〔1〕，這種形狀可以充分利用雜交池內(nèi)有限的平面面積，盡量延長微電極的總長度。電極貼附在玻璃片〔3〕上，塑料池壁〔2〕同玻璃片的接觸部用粘合劑粘合。電極最好由黃金制成，這樣的電極表層不產(chǎn)生氧化層，對細(xì)胞培養(yǎng)無害。雜交池內(nèi)的多個微電極也可做成多個相互平行的條形電極〔5〕，利用玻璃離心管〔7〕做為雜交池，可以盡量延長條形電極的長度，將電極貼付在玻璃片〔6〕上，反轉(zhuǎn)放置在玻璃離心管內(nèi)，電極的兩根導(dǎo)線〔8〕經(jīng)管口塞〔9〕處引出。使用這樣的雜交池便于在融合后直接離心，去除電解液，在離心管內(nèi)對融合細(xì)胞進(jìn)行初步培養(yǎng)，減少已融合細(xì)胞的損失。這種多微電極最好也由黃金制成。另一種多微電極的形狀是垂直式的（圖6、圖7），該多微電極〔10〕一側(cè)為一金屬絲，另一側(cè)為多個垂直放置的并聯(lián)金屬絲，這樣多微電極間可以形成多個有效空間定向排列區(qū)域，這種多微電極細(xì)胞擊穿電壓范圍廣，空間定向排列電壓和直流脈沖擊穿電壓低。該多微電極適于觀察細(xì)胞定向排列的示數(shù)，該多微電極最好由鉑絲制成因其鋼度較好。

本實(shí)用新型的另一特征是：本實(shí)用新型中高頻交變電場直流脈沖儀的高壓脈沖 發(fā)生及沖擊轉(zhuǎn)換電路中采用電容器件（圖8），交流電流經(jīng)降壓，整流后充入電容C₁、C₂、C₃中，一旦手動接通轉(zhuǎn)換沖擊形狀，電容高速放電，擊穿已經(jīng)空間定向排列好的細(xì)胞，建場和擊穿互不影響，因而融合率高。采用手控方式，借助顯微鏡可以靈活掌握擊穿時機(jī)，以取得最優(yōu)擊穿效果。

本實(shí)用新型提出的電場誘導(dǎo)雜交儀較目前使用的雜交儀具有融合率高，適用范圍廣、電路簡單、性能可靠等優(yōu)點(diǎn)。

圖1為本實(shí)用新型雜交儀的結(jié)構(gòu)示意圖。A為高頻電場直流脈沖聯(lián)合儀，B為多微電極雜交池。

圖2、圖3分別為多折角式多微電極雜交池的主視圖和俯視圖，圖中1為多微電極，2為塑料雜交池壁，3為玻璃片，4為導(dǎo)線。

圖4、圖5分別為條形多微電極雜交池的主視圖和側(cè)視圖。圖中5為電極，6為玻璃片，7為玻璃離心管，8為導(dǎo)線，9為管口塞。

圖6、圖7是垂直式多微電極雜交池的主視圖和俯視圖。圖中10為電極，11為塑料池壁，12為玻璃片，13為導(dǎo)線。

圖8為高壓脈沖發(fā)生電路和沖擊開關(guān)電路的電路圖。

實(shí)施例1：