[其他]相應于輪狀病毒的主要中和蛋白質的抗原和免疫決定子的肽

無效

• 申請號: 86108975
• 申請日: 1986-12-25
• 公開（公告）號: CN86108975A
• 公開（公告）日: 1988-01-06
• 發明（設計）人: 瑪爾塔·艾里斯·約翰娜·薩巴拉;帕特里克·約翰·弗倫奇克;安德魯·艾倫·波特;穆罕默德·哈利德·伊賈茲;詹姆斯·埃爾頓·吉爾克里斯特
• 申請（專利權）人: 薩斯喀徹溫大學
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K37/02
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 楊鋼

本發明涉及輪狀病毒的主要外殼中和糖蛋白（病毒蛋白7或VP₇），內或殼包核酸蛋白（病毒蛋白6或VP₆）及外殼蛋白（病毒蛋白3或VP₃）肽片斷，及用它們作鳥類和包括人在內的動物體內的疫苗。本發明進一步涉及有關輪狀病毒肽片斷的制備，涉及將肽粘附在載體上，涉及將它們用作疫苗。VP₃肽的另一特點是它能與輪狀病毒競爭胰蛋白酶，因而阻礙病毒傳染。所以，VP₃肽也可有治療用途。

附圖簡述

圖1表示輪狀病毒VP₇糖蛋白的氨基酸順序，14K多肽列于框內。

圖2表示SA-11基因6克隆復制體的核苷酸序列。示出了（+）向股（對應于mRNA）。示出了蛋白產物的予計的氨基酸順序，終端部位下劃了線。

圖3示出輪狀病毒VP₃蛋白的氨基酸順序。C486（牛的）VP₃氨基酸順序在我們的實驗室中得到。SA-11（猴的）VP₃氨基酸順序來自現有技術。

圖4示出牛輪狀病毒（BRV）14K肽片斷的分離。泳道A和B分別圖解說明用65μg木瓜蛋白酶/cm凝膠和130μg木瓜蛋白酶/cm凝膠制成的BRV糖蛋白的降解模式。泳道C圖解說明提純的14K肽片斷。泳道表示雜交瘤11D12-6與單克隆抗體的免疫斑-ELISA反應。泳道D圖解說明在銀染色的聚丙烯酰胺凝膠中的提純的14K肽片斷。

圖5示出在免疫進程中三個不同時間14K多肽各種制劑的抗體效價。上面部分示出使用雙殼輪狀病毒作為抗原由ELISA測定的總抗體效價。下面部分示出用噬斑減數檢測法測定的中和抗體的效價。A組，14K未結合的多肽;B組，14K BSA-結合的多肽;C組，提純的VP₇;D組，傳染性的牛輪狀病毒（BRV）;E₁組，受傳染性BRV61天的動物;E₂組，施用佐劑的動物。免疫作用記錄在表2中更詳細地敘述。

圖6示出老鼠血清與C486牛輪狀病毒（BRV）蛋白的免疫斑ELISA反應。泳道P，予抽血的;泳道A，施用14K未結合的多肽的組;泳道B，14K結合的多肽;泳道C，施用BRV VP₇（38.2K糖蛋白）的組;泳道D，施用傳染性病毒的組;泳道E和E₂分別施用鹽水和弗羅因德氏（Freund）完全佐劑的組。各組的免疫進程在表2中更詳細地敘述。

圖7示出為確定14K的位置用金黃色釀膿葡萄球菌V₈蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和溴化氰對VP₇進行解離的模式。

圖8示出合成肽VP₇阻止病毒粘附在細胞上的能力。

圖9示出合成肽的ELISA抗體效價。

圖10示出在老鼠體內由合成肽VP₇誘導的經病毒中和的抗體效價。

圖11示出由單克隆1D₇（泳道B）;1B₄（泳道C）;1B₉（泳道D）和1D₁₀（泳道E）免疫沉淀〔³⁵S〕蛋氨酸示蹤牛輪狀病毒感染的細胞的溶胞產物。泳道A，是與由超免疫產生的兔抗牛輪狀病毒抗體的反應。分子量標志的位置在左邊。

圖12示出單克隆抗體和單特異性多克隆抗血清與轉移到硝化纖維素薄膜上的牛輪狀病毒多肽的反應。泳道A，單克隆抗體1D₇;泳道B，1B₄;泳道C，1B₉;泳道D，1D₁₀和泳道E，抗殼包核酸單特異性抗血清。反應蛋白的分子量給在左邊。

圖13示出牛、猴、豬和人輪狀病毒VP₆殼包核酸蛋白與單克隆抗體1B₄的免疫斑ELISA反應。泳道A，從牛分離出的C486;泳道B，從豬分離出的OSU;泳道C，從牛分離出的NCDV;泳道D，從人分離出的Wa;泳道E，從牛分離出的UK;泳道F，從人分離出的ST₄;泳道G，從猴分離出的SA-11。從人分離出的Wa和ST4屬亞群2，而所有其它分離物屬亞群1。分子量在右邊指明，腹水對照也標明。