[其他]對抑制素α或β鏈編碼的核酸以及用此核酸合成多肽的方法

無效

• 申請號: 86106915
• 申請日: 1986-10-21
• 公開（公告）號: CN86106915A
• 公開（公告）日: 1988-02-17
• 發明（設計）人: 安東尼·約翰·馬森;彼得豪斯西柏格
• 申請（專利權）人: 吉納特斯公司
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;A61K37/43
• 代理公司: 上海專利事務所
• 代理人: 徐志奇,夏曉

這是在1986年2月7日申請的美國申請號為827，710的一個連續申請，而那個申請又是在1985年10月3日申請的美國申請號為783，910的連續申請。

本發明涉及從含有抑制素的α或β鏈的重組細胞培養物中制備蛋白質的方法。具體地說是涉及獲得和運用為抑制素編碼的DNA的方法以及制備天然動物和人類的抑制素類的氨基酸序列及其自然出現的等位基因不一致的抑制素變異體的方法。

抑制素是在生殖腺中產生的一種蛋白質，它在垂體級起特殊作用，以抑制促卵（濾）泡激素（FSH）的分泌。在1932年（“科學（Science）”76：19-20）中邁克拉夫（Mc????Cullagh）第一次假設抑制素的存在。這種促性腺激素分泌的擇優調節產生了很大的意義，并且在過去的五十年中促使許多實驗的興起，而試圖用各種生物檢定從睪丸，精子、睪丸網液體、精液漿和卵巢濾泡液的抽提物中分離出的這物質并確定其特性。盡管文獻中已出現許多報道聲稱純化了分子量在5，000至100，000道爾頓之間的抑制素類似物，但后來的研究表明這些物質不是抑制素的類似物，不具有人們期望的真正抑素的高效的活性和/或不能顯示出如這兒所描述的抑制素的分子性質[德瓊，抑制素因素人造物，“分子和細胞內分泌”13：1-10（1979）;謝斯等人，1984，“F.E.B.S.”165（1）11-15;茜德赫等人，1984年，“F.E.B.S.”175（2）：349-355;里爾加等人，1985年3月，“F.E.B.S.”182（1）：181-184;李等人，1985年6月，“美國自然科學院學報”82：4041-4044;茜德赫等人，“F.E.B.S.”167：（1）98-102;以及貝克瑟克等人，1984，“男性生殖器病學國際雜志”7：389-397（de????Jong，Inhibin????Factor????Artifact，“Molecular????&????Cellular????Endocrin.”13：1-10（1979）;Sheth????el????al.，1984，“F.E.B.S.”165（1）11-15;Seidah????et????al.，1984，“F.E.B.S.”175（2）：349-355;Lilja????et????al.，Match????1985，“F.E.B.S.”182（1）：181-184;Li????et????al.，June????1985，“Proc.Nat.Acad.Sci.USA”82：4041-4044;Seidah????et????al.，“F.E.B.S.”167（1）98-102;and????Beksac????et????al.，1984，“Intern.J.Andrology”7：389-397）].

一種具有抑制素活性的多肽從牛的或羊的濾泡液中純化而得[血漿試驗（PCT）86/00078，1986年1月3日出版]。據報道，此蛋白質在SDS-PAGE上具有分量56，000±1，000，并且它可被分離成具有表觀分子量44，000±3，000和14，000±2，000的兩個亞單元。并且對每一個亞單元的氨基末端序列作了描述。

成功地從豬的濾泡液中分離出兩種均具有分子量約32，000道爾頓和抑制素活性的蛋白質。豬抑制素的純化基本上達到同質性的程度，即通過包括肝素-瓊脂糖親和色譜法、凝膠過濾和反相高效液相色譜法（RP-HPLC）的一系列蛋白質分離過程使級分達到蛋白質總重量的90%左右。