[其他]受體抗體夾層檢測法

無效

• 申請號: 86105930
• 申請日: 1986-09-03
• 公開（公告）號: CN86105930A
• 公開（公告）日: 1987-03-11
• 發明（設計）人: 安格洛·科爾蒂;安格洛·伯費;卡洛·魯拉利;吉奧瓦厄·卡薩尼;弗郎西斯科·帕倫蒂
• 申請（專利權）人: 渴魯波萊佩蒂特公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/53;G01N33/535
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 顧柏棣,辛敏忠

本發明涉及到測定的底物結合D-丙氨酰-D-丙氨酸二肽或D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基末端寡肽能力的新的夾層試驗。它對測定萬古霉素類的糖肽抗菌素或其衍生物或糖苷配基本身都有特殊的應用價值。本實驗對萬古霉素類抗菌素合適的D-丙氨酰-D丙氨酸衍生物以及欲測定的該類物質的抗菌素所指向的抗體特異性具有高度選擇性的結合。

萬古霉素類抗菌素的例子（除萬古霉素外）有特柯普蘭素（teicoplanin），actaplanin，瑞斯托素，阿伏霉素（avoparcin），放線菌素（actinoidin），抗菌素LL-AM-374，抗菌素A477，抗菌素OA7653，抗菌素A35512????B，抗菌素A515668，抗菌素AAD216，抗菌素A41030，抗菌素A47934以及它們的個別因子，衍生物和糖苷配基本身。

眾所周知萬古霉素和瑞斯托素A干擾粘肽的合成。粘肽是細菌細胞壁的主要構成成分。認為導致細胞生長受到抑制，最終由于細胞溶解而死亡的原因，是由于這些抗菌素和在羧基末端有-D-丙氨酰-D-丙氨酸殘基（尿苷二磷酸-N-乙酸胞壁酸五肽）的五肽前體之間的特異性結合的結果。

近來發現特柯普蘭素也是通過結合于敏感細菌生長著的粘肽的同樣機制，而起作用的。更為特殊地，特柯普蘭素和瑞斯托素A以及相類似的抗菌素結合到在羧基末端含一個D-丙氨酰-D-丙氨酸二肽的粘肽上去。通過同樣的作用，它們可能抑制細菌的轉肽酶并防止細胞壁粘肽的交聯。這些抗菌素類也結合一個D-丙氨酰-D-丙氨酸二肽或一個D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基末端的寡肽。同樣，萬古霉素類的其它抗菌素現已證明或被認為是通過相同的作用機制而起作用的，所以這類抗菌素對一個D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基末端的寡肽具有結合能力，并能在適當的宿主中，誘發出針對它們的抗體的形成。本發明的方法除了可用于萬古霉素類抗生素以外，還可以用于確定那些能結合D-丙氨酰-D-丙氨酸二肽或D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基末端寡肽并能在適當宿主中誘發出針對它們的抗體的形成的非糖肽類或非萬古霉素類抗生素。因此，D-丙氨酰-D-丙氨酸二肽或一個D-丙氨酰-D-丙氨酸寡肽可以看作上述抗菌素物質的一個“分子受體”。

迄今所知的測定抗菌素物質的方法，特別是特柯普蘭素和萬古霉素類的抗菌素，主要基于TLC，HPLC和敏感微生物的生物試驗。鑒于現代治療學的應用或這些抗菌素中某些高級的醫學研究，勢必需有一種在液體中，特別在生物液體中的測定方法，這種測定方法應是特異的，迅速的，易行的，可靠的和適于自動化操作的。

特別在體內的分泌物，支氣管痰，膿，燒傷病人皮膚樣品等等，用現有的技術探測這些物質是非常困難的，因為常常得到假陽性的結果。本發明的方法，恰巧相反，同樣是那些樣品卻是準確可靠的。

因而，本發明的方法對于特殊測定具有與“分子受體”相當于一個D-丙氨酰-D-丙氨酸二肽或一個D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基末端寡肽的結合特征的分析物（analyte）是一種快速，易行，可靠，直接的方法。特別是本發明的這種方法可以允許萬古霉素類的一種抗菌素的特異測定，甚至在同類的另外一種抗菌素存在的情況下，仍具高度的靈敏性，準確性和精確性。

更為特別的是，本發明方法包括：

a）試驗溶液接觸支持D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基末端寡肽的表面，該寡肽與一個合適的大分子載體相結合，能夠吸附于所說的表面;

b）沖洗之后，加入特異指向被測定物的抗體;

c）暴露所說的借助于直接趨向這些結合抗體（抗一抗體抗血清）的一個種屬一特異性的一抗一Ig????G-抗體而結合到固相抗原上的抗體。這些結合抗體偶合一個探測標記。D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基末端寡肽可以是三、四、五、六或七肽，其中的羧基末端二肽由D-丙氨酰-D-丙氨酸所代表。本發明優選的D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基末端寡肽是ε-氨基己酰-D丙氨酰-D-丙氨酸（在下文以ε-Aca-D-Ala-D-Ala表示）三肽。

D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基末端寡肽與一個合適的載體相連的目的是使其能吸附在固相表面。在這種情況下，合適的載體可以是任何蛋白質或其它能夠共價連結到D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基末端寡肽、給出一個與選擇的固相表面有吸附能力（即收縮的物理鍵力）的結合點的高分子量物質。

這樣一種優先選用的一個例子是清蛋白，特別是牛血清蛋白。而雞旦，人或豬清蛋白也是可用的。