[其他]牛焦蟲苗的生產(chǎn)工藝

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 86103544
• 申請(qǐng)日: 1986-05-22
• 公開（公告）號(hào): CN86103544A
• 公開（公告）日: 1987-12-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙巨奎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆維吾爾自治區(qū)畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12N1/10
• 分類號(hào): C12N1/10;A61K31/018
• 代理公司: 新疆專利服務(wù)中心
• 代理人: 莊曉秋

本發(fā)明是一種預(yù)防牛環(huán)形泰勒焦蟲病的特效疫苗新的生產(chǎn)工藝，屬于獸醫(yī)生物藥品制造技術(shù)領(lǐng)域，該工藝以病牛的血源白細(xì)胞為原料，采用攪拌懸浮培養(yǎng)的生產(chǎn)方法生產(chǎn)牛焦蟲病疫苗。

曾請(qǐng)北京大學(xué)圖書館用計(jì)算機(jī)查從1973年至1985年的有關(guān)懸浮培養(yǎng)法的資料，共查到1600篇，其中攪拌懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的資料有20篇，用于培養(yǎng)焦蟲細(xì)胞苗的沒有，有一篇牛焦蟲的靜置懸浮培養(yǎng)（附電算機(jī)檢索文件一份）。

查專利文獻(xiàn)：查到一篇中國(guó)專利局專利文獻(xiàn)，申請(qǐng)?zhí)?5100848。

現(xiàn)已有的培養(yǎng)泰勒焦蟲細(xì)胞苗的方法是：靜置單層和靜置懸浮培養(yǎng)法;慢速和快速轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)法。這些方法的共同點(diǎn)是：在傳代擴(kuò)大再生產(chǎn)時(shí)，細(xì)胞有一部分貼于瓶壁生長(zhǎng)，不易脫落，靜置培養(yǎng)和慢速轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)法還需用威爾遜液脫落，細(xì)胞產(chǎn)率低，即使細(xì)胞貼壁較少的快速轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)法，其生產(chǎn)分瓶率也只有1∶2，需擴(kuò)大再生產(chǎn)時(shí)，細(xì)胞懸液需要離心，去棄舊液，加入新營(yíng)養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)、費(fèi)工、費(fèi)時(shí)，疫苗產(chǎn)量低，生產(chǎn)成本高。

該發(fā)明的任務(wù)是提供一種新的生產(chǎn)工藝，解決以往各種工藝方法的不足，以達(dá)到操作簡(jiǎn)便、細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖快、耗用培養(yǎng)液、化學(xué)藥品少，成本低，疫苗產(chǎn)量高的目的。

其解決方案是：改變?cè)囵B(yǎng)液（伊格氏液40%+40%水解乳蛋白+牛血清20%）的成份，在原培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上加入必需的氨基酸、維生素，用時(shí)再臨時(shí)加入少量谷氨胺液和“三素”液（含青霉素、鏈霉素和卡那霉素的混合液），配好后用碳酸氫鈉液將培養(yǎng)液的PH值調(diào)節(jié)到7.2～7.4。改轉(zhuǎn)瓶生產(chǎn)為發(fā)酵罐攪拌懸浮生產(chǎn)。首先用靜置單層培養(yǎng)的含焦蟲傳代細(xì)胞經(jīng)懸浮馴化培養(yǎng)，再接種到發(fā)酵罐進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，48小時(shí)后，取出2/3的細(xì)胞液制苗，將新的培養(yǎng)液倒入余下的1/3的細(xì)胞液中繼續(xù)培養(yǎng)，進(jìn)行再生產(chǎn)。

1982年10月制定了“牛環(huán)形泰勒焦蟲病血源高代細(xì)胞苗的制作規(guī)程”，規(guī)定該苗制造為七個(gè)步驟：1.種子細(xì)胞的保存;2.種子細(xì)胞的復(fù)蘇;3.細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代;4.膠胨細(xì)胞苗的配制;5.無菌檢驗(yàn);6.安全和效力檢驗(yàn);7.膠胨細(xì)胞苗的使用。根據(jù)該規(guī)程，可生產(chǎn)出成本低、產(chǎn)量高的合格的疫苗。

實(shí)施例：1986年2月，該研究小組用新的生產(chǎn)工藝進(jìn)行了大批量疫苗生產(chǎn)，每毫升培養(yǎng)液生產(chǎn)細(xì)胞250萬個(gè)，比原產(chǎn)量（100萬個(gè)/毫升）細(xì)胞產(chǎn)率提高了150%，使疫苗產(chǎn)量提高了大約4倍，而使用的培養(yǎng)液僅為原用量的20%，成本降低了60%，操作簡(jiǎn)便，適于大規(guī)模的生產(chǎn)。