[其他]生產L-賴氨酸的方法

無效

• 申請號: 86103512
• 申請日: 1986-05-23
• 公開（公告）號: CN86103512A
• 公開（公告）日: 1987-12-02
• 發明（設計）人: 勝亦瞭一;水上透;岡微夫
• 申請（專利權）人: 協和發酵工業株式會社
• 主分類號: C12P13/08
• 分類號: C12P13/08;//
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 辛敏忠,顧柏棣

本發明是關于生產L-賴氨酸的方法，包括將一個含與合成二氫二吡啶羧酸合成酶（DDPS）或琥珀酰四氫吡啶羧酸合成酶（THPS）有關基因的DNA片段的重組DNA和一個載體DNA引入棒狀桿菌屬（Corynebacterium）或短頸細菌屬（Brevibacterium）的微生物中，在培養基中培養該微生物，再從培養肉湯中回收產生的L-賴氨酸。因此，本發明是屬于生物工程領域，特別是涉及生產L-賴氨酸，將其用作飼料工業的添加劑。

用重組DNA技術改良諸如：棒狀桿菌屬和短頸細菌屬等產生谷氨酸的微生物，從而增加L-賴氨酸的產率。這在日本專利公開No160997/81，126789/83中已經揭示了。

改進大量生產L-賴氨酸的方法一直是個懸而未解的問題，本發明通過大量研究，更有效地利用重組DNA技術解決了這個問題。

本發明人發現可以用一個含有負責生物合成L-賴氨酸的基因重組體和一個載體質粒的菌株來改善L-賴氨酸的產率。

本發明涉及生產L-賴氨酸的方法，該方法包括將一個與合成DDPS或THPS有關基因片段的重組DNA和一個載體DNA引入屬于棒狀桿菌屬或短頸細菌屬的微生物，將該微生物在適當培養基中培養，再從培養肉湯中回收累積產生的L-賴氨酸。

圖1表示制備載體質粒PFC18的流程，其中SPC/SM表示抗壯觀霉素和鍵霉素抗性標記，AP為氨芐青霉素抗性標計，而Tc是四環素抗性標記。

根據本發明，可通過將一個含與合成DDPS或THPS有關基因片段的重組DNA和一個載體DNA的棒狀桿菌屬或短頸細菌屬的微生物培養在適當培養基中，讓其在肉湯培養基中積累生產的L-賴氨酸，然后從肉湯中回收L-賴氨酸。

當用棒狀桿菌屬或短頸細菌屬微生物作為宿主微生物時，任一個已知是所謂產生谷氨酸的微生物均可應用。優選的是下列菌株;

谷氨酸棒桿菌corynebacterium????glutamicum????ATCC13022

嗜乙酰乙酸棒桿菌corynebacterium????ATCC13870

acetoacidophilum

力士棒桿菌corynebacterium????herculis????ATCC13868

百合棒桿菌corynebacterium????lilium????ATCC15990

叉開短桿菌Brevibacterium????divaricatum????ATCC14020

黃色短桿菌Brevibacterium????flavum????ATCC14067

非嗜海洋短桿菌Brevibacterium????ATCC14068

immariophilrium

乳酚發酵短桿菌Brevibacterium????ATCC13869

lactofermentun

產硫短桿菌Brevibacterium????ATCC19240

thiogenitalis

可用不產生賴氨酸的野生型菌株作為宿生微生物，但也可用產生賴氨酸菌株。作為生產賴氨酸的菌株，可用已知需要氨基酸的突變菌株及抗氨基酸類似物菌株。

作為與合成DDPS或THPS有關的基因，可用任何從真核生物、原核生物、病毒、噬菌體或質粒得到的。屬于原核細菌菌株的基因，例如，屬于大腸桿菌屬，棒狀桿屬、短頸細菌屬、細桿菌屬（Microbacterium）、芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬、鏈球菌屬，或沙雷氏菌屬為特別優選的。

本發明優選的用于結合到上述基因的DNA片段的載體有PCG1，PCG2，PCG4，PCG11，PCE54，PCB101等。生產這些載體的方法分別揭示在日本未審查專利N134500/82，183799/82，35197/83和105999/83。

根據重組DNA技術可得到含與合成DDPS或THPS有關基因DNA片段的重組DNA，該技術包括用限制酶體外酶切DNA，再用DNA連接酶重組酶切的DNA，然后用其轉化屬于棒狀桿菌屬或短頸細菌屬突變菌株的缺乏賴氨酸基因的菌株，選擇恢復產生賴氨酸能力的菌株。可根據日本未審查專利申請No186492/82和186489/82所述的方法進行DNA重組。