[其他]一種金屬螯合蛋白質配合物的形成方法

無效

• 申請號: 86103488
• 申請日: 1986-04-26
• 公開（公告）號: CN86103488A
• 公開（公告）日: 1987-05-27
• 發明（設計）人: 奧托·A·岡索
• 申請（專利權）人: 奧托·A·岡索
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61K43/00;A61K49/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 顧柏棣,辛敏忠

本發明介紹金屬螯合蛋白質配合物和一種形成金屬螯合蛋白質配合物的改進方法。

從治療和診斷兩個目的來說，使用金屬螯合蛋白質配合物繼續有著令人感興趣的技巧。特別在美國專利4，454，106和4，472，509中介紹了有代表類型的配合物。一種這樣類型的配合物是金屬螯合單克隆抗體配合物。形成金屬螯合蛋白質配合物也能使用其它的蛋白質，如多克隆抗體、抗原和血蛋白質。

一般，按現有技術可形成螯合物和蛋白質的配合物，而后把配合物與要螯合的金屬相混。這樣的方法象在美國專利4，472，509中介紹過的，是可行的。為了提供螯合物里基本上含各種金屬的配合物，有必要采用幾種保護措施。作為起始物質，由于金屬與蛋白質的存在可能阻遏所要求的螯合位置，所以使用的蛋白質基本上不含金屬螯合物。另外，蛋白質有沿其分子額外鍵合金屬的固有本領。這樣，金屬據其本身可以或強或弱地被鍵合。由此也提出從蛋白質去除額外鍵合金屬的重要問題。某些額外鍵合的金屬可能（并且常常）在體內被釋放，尤其對于放射性金屬，在骨髓里或類似物里可能產生所不需要的金屬濃度。美國專利4，472，509中介紹了去除額外被鍵合金屬，生成金屬螯合蛋白質配合物的方法。

接下的是需要有效金屬螯合蛋白質配合物和形成金屬螯合蛋白質配合物的有效方法，該方法基本上不需要去除額外鍵合的金屬、所采用的蛋白質的預純化作用和/或后處理。

本發明的一個目的是提供一種不需要預先嚴格純化蛋白質而形成一種金屬螯合蛋白質配合物的方法。

本發明的進一步的目的是提供一種不引起額外鍵合金屬而形成金屬螯合蛋白質配合物的方法。

本發明還有一個目的是提供一種不需要使用放射性核素的非載體或無載體，形成放射性金屬螯合蛋白質配合物的方法。

本發明的再一個目的是提供一種形成穩定金屬螯合蛋白質配合物的有效方法。

本發明還有進一步的目的是提供一種新的雙功能螯合物和新的取代的二亞乙基三胺。

本發明再進一步的目的是提供一種新的金屬螯合蛋白質配合物。

本發明考慮形成金屬螯合蛋白質配合物的方法是：

在沒有蛋白質時，用連到螯合物主鏈碳原子上的官能團作為它的分子結構的一部分的雙功能螯合物接觸金屬。在稀水溶液里，用于金屬螯合作用的pH范圍約1到7，它是穩定的。在配合的pH約6到11的范圍里，它直接與蛋白質氨基酸殘基反應，形成穩定的共價鍵合。

在pH約6到11的一種水溶液中，把蛋白質和上述的金屬螯合物混合，形成穩定的金屬螯合蛋白質配合物。

另一方面，本發明考慮的一種特別有用的雙功能金屬螯合物包括碳主鏈上被含硝基的側鏈取代的二亞乙基三胺五乙酸。其它方面，本發明考慮主碳鏈上被含異硫氰酸基側鏈或含N-羥基琥珀酰亞胺酯取代基側鏈取代的二亞乙基三胺五乙酸和由此形成的金屬螯合蛋白質配合物。

實施本發明的方法基本上排除了額外鍵合的金屬。通過選擇螯合物適當地官能團能迅速形成金屬螯合蛋白質配合物。這樣的形成物，根據本發明，各種放射性核素都行，包括有效處理過的相對短的半衰期核素。此外，鑒于配合物常常在稍微堿性的pH下形成，形成配合物慢可導致不需要的副作用。這些副作用包括隨螯合物金屬的減少金屬水解，并且蛋白質表面沉積不需要的額外鍵合金屬。此外，金屬的水解可導致形成與蛋白質分離不同的不需要的膠體。而且，用迅速的偶聯反應提供撓性且構成一套實用的方法，因此，擴大了可利用的金屬螯合蛋白質配合物的實驗點。

已經表明把螯合物偶聯到蛋白質上有效的許多活性基團不適于本發明。因此，二硫化物或順丁烯二酰亞胺往往在體內或血清內的pH范圍的水中解離;氮烯、氨磺酰物、碳化二亞胺、磺酰氯和酐在配合反應條件的水中往往是不穩定的;benzimidates、氯代乙酰胺、酰肼和重氮化的氨基往往低效配合;疊氮化物和氮烯可光解偶聯，它們導致配合作用低效并且反應需要大量設備。

“分析生物化學”（Yeh，Analytical????Biochemistry），100，152-159（1977）報導過連在乙二胺四乙酸（EDTA）主碳鏈含COOH官能團側鏈（1-（對羧基甲氧芐基）乙二胺四乙酸）的用途。Yeh報導，鐵和銦與蛋白質配合作用前，通過碳化二亞胺偶聯反應把鐵和銦都螯合。由于偶聯官能團也是一個COOH基團，所以，把鐵和銦聯結到分子的EDTA蛋白質部分所必需的COOH官能團上。這種方法需要非常過量的雙功能螯合物并且也導致某些蛋白質的二聚作用。Yeh報導，配合作用后要去除鐵，然后加需要的金屬離子。Yeh還報導過，銦作為阻滯劑對EDTA羧酸鹽是無效的，因而導致不穩定的金屬螯合蛋白質配合物。