[其他]培養原生質體的方法

無效

• 申請號: 86103461
• 申請日: 1986-05-21
• 公開（公告）號: CN86103461B
• 公開（公告）日: 1988-04-06
• 發明（設計）人: 藤村達人;櫻井基
• 申請（專利權）人: 三井東壓化學株式會社
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 羅宏

本發明是關于培養原生質體的方法;進一步說來，本發明是關于在液體介質中培養原生質體的方法，借以從這種原生質體中產生細胞群或愈傷組織（Callus）。

原生質體是除去細胞壁的植物、細菌、真菌等等的細胞。由于原生質體沒有細胞壁，所以它容易受到例如細胞融合、基因操縱和人工體細胞突變等人工操縱。因此，如果能夠從某種受操縱的原生質體再生完整植株，那么就可以獲得具有某種野生植物所不具備的優良特性的植物。對于許多植物來說，已知可以從愈傷組織或細胞群再生完整植株;因此，如果能夠從原生質體產生出愈傷組織，那么就有可能由該愈傷組織再生出某種完整植株，依次從這種原生質體再生出完整植株。

對于例如煙草等雙子葉植物，已知一些能夠從原生質體再生出完整植株的方法。但是，對于諸如水稻麥和玉米等屬于禾本科的植物來說，僅僅報導有玉米和牧草的完整植株被再生出來的方法。正如下面將要提到的那樣，對于水稻來說，報導過的方法卻極為稀少。原生質體的傳統培養方法包括：利用將原生質體包埋在半固態瓊脂介質中培養原生質體，將原生質體懸浮在液體介質中，以及利用喂養細胞培養原生質體等方法。然而已經發現，這些方法對于培養其它植物來說，例如對于包括水稻、麥和玉米的屬于禾本科植物來說，常常是無效的。例如，假如用這些方法之一來培養水稻的原生質體，則該原生質體死亡或不能生長。

對于水稻原生質體的培養方法：已經報導了由某種原生質體產出了一種愈傷組織，而該原生質體是從缺少硝酸鹽還原酶的某種細胞獲得的（Wakasa等人，J.PlantPhysiol.，117，223-231頁，1984），另外還報導了由某種花粉的愈傷組織得到了某種原生質體，進而由此原生質體衍生出某種愈傷組織，再由其產出幼芽（Ohno等人，JapaneseJournalofBreeding，35，54-55頁，1985）。但是，這些方法利用的是由特定的愈傷組織釋放出的原生質體，而且對于由各種愈傷組織或組織中釋放出來的各類原生質體來說不能全部適用。換句話說，這些方法對于絕大多數原生質體來說不能再現。

另一方面，許多研究者報導過由培養的水稻細胞再生完整植株（Nishi等人，Nature，219，508-509頁，（1968））。但是這些方法並不利用原生質體。而且發現，由這些方法中使用的、具有高度分化能力的細胞，很難得到原生質體，而且該原生質體也難于培養。

因此，需要建立一種培養原生質體的方法，利用這個方法可以從該原生質體中衍生出某種愈傷組織或細胞群，該方法可以再現而且可以用于起源於普通植物細胞或非特定植物細胞的原生質體。

本發明目的在于提出一種培養原生質體的方法，利用此方法可以從該原生質體衍生出細胞群或愈傷組織，該方法可以再現並且可以用于那些來源于普通植物細胞或非特定植物細胞的原生質體。

按照本發明方法，在PH不高于5.2的液體介質中培養原生質體。在傳統的培養原生質體的方法中，將培養介質的PH調節到5.5-6.0。本發明基于本發明人等的意外發現，即培養介質的PH被調節到5.2或更低，則原生質體生長良好而且形成細胞群。

按照本發明方法，不僅雙子葉植物的原生質體，而且甚至于單子葉植物的原生質體也可以很好地生長，形成愈傷組織或細胞群。

正如上述的那樣，在本發明方法中，于PH不高于5.2的液體介質中培養原生質體。液體培養介質的PH，優選值為3.5-5.2，更優選4.0-4.7。可以用加入酸（在某些情況下加入堿）的方法調節PH。調節PH時可以使用任何酸（或堿），只要它不產生對原生質體生長的不利影響就可以使用，為此通常使用HCl和KOH。