[其他]培養(yǎng)原生質(zhì)體的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 86103374
• 申請(qǐng)日: 1986-05-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN86103374B
• 公開(kāi)（公告）日: 1988-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 藤村達(dá)人;櫻井基
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 三井東壓化學(xué)株式會(huì)社
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/00
• 代理公司: 中國(guó)專(zhuān)利代理有限公司
• 代理人: 羅宏

本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)原生質(zhì)體的方法。更明確地是本發(fā)明涉及在一種液體介質(zhì)中培養(yǎng)原生質(zhì)體的方法，利用這種方法從原生質(zhì)體衍生出一種愈傷組織或細(xì)胞簇。

原生質(zhì)體是植物、細(xì)菌、真菌等等的脫去細(xì)胞壁的細(xì)胞。因?yàn)樵|(zhì)體沒(méi)有細(xì)胞壁，它易于受到諸如細(xì)胞融合、基因控制及人工體細(xì)胞突變這樣的人工操作。這樣，假如一種完整植株可由被操作的原生質(zhì)體再生，那么得到一種具有野生型植物所沒(méi)有的有利的特性的植物將是可能的。一種完整植株可由愈傷組織或細(xì)胞簇再生，這對(duì)許多植物來(lái)說(shuō)都是已知的。這樣，如果一種愈傷組織能由原生質(zhì)體衍生出來(lái)，一株完整植株看來(lái)能由愈傷組織再生，依次地能由原生質(zhì)體再生。

對(duì)于象煙草這樣的雙子葉植物，有些技術(shù)是已知的，一種完整植株可用這些技術(shù)從原生質(zhì)體再生出來(lái)。但對(duì)象水稻、小麥和玉米這樣的禾本科植物，據(jù)報(bào)導(dǎo)僅有玉米和牧草能再生完整植株。至于水稻很少數(shù)的技術(shù)已有報(bào)導(dǎo)如下所述。原生質(zhì)體的常規(guī)培養(yǎng)方法包括把原生質(zhì)體埋在半固體瓊脂介質(zhì)中，把原生質(zhì)體懸浮在液體介質(zhì)中以及用喂養(yǎng)細(xì)胞來(lái)培養(yǎng)原生質(zhì)體的原生質(zhì)體培養(yǎng)法。但是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些技術(shù)對(duì)培養(yǎng)其它植物象水稻、小麥和玉米的禾本科植物常常沒(méi)有什么效果。例如，如果水稻的原生質(zhì)體用這些方法中的一種來(lái)培養(yǎng)，原生質(zhì)體就死亡或不生長(zhǎng)。

至于水稻的原生質(zhì)體的培養(yǎng)技術(shù)已有報(bào)導(dǎo)，由缺乏其硝酸鹽還原酶的細(xì)胞得到的一種原生質(zhì)體衍生出來(lái)一個(gè)愈傷組織（Wakasa等，J.PlantPhysiol，117，PP223～231（1984）），一個(gè)苗是由一種愈傷組織再生來(lái)的，這種愈傷組織是由花粉的愈傷組織得到的原生質(zhì)體衍生來(lái)的（Ohno等，JapaneseJournalOfBreeding35：PP54-55（1985））。然而，這些技術(shù)利用從特定的愈傷組織釋放出的原生質(zhì)體，而且這些技術(shù)并不是對(duì)從各種愈傷組織或組織釋放的各種原生質(zhì)體都適用的。換言之，這些技術(shù)并不是對(duì)大多數(shù)種類(lèi)的原生質(zhì)體都有重復(fù)性。

另一方面，許多研究人員已報(bào)導(dǎo)了完整植株已從水稻的培養(yǎng)細(xì)胞再生出來(lái)的技術(shù)（Nishi等人，Nature219：PP.508-509（1968））。然而這些技術(shù)并不使用原生質(zhì)體。此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)從在這些技術(shù)中所使用的具有高度分化能力的細(xì)胞得到一種原生質(zhì)體是困難的，而且培養(yǎng)這種原生質(zhì)體也是困難的。

這樣，就需要建立一種從原生質(zhì)體衍生一種愈傷組織或細(xì)胞簇的培養(yǎng)原生質(zhì)體的方法，這種方法對(duì)于來(lái)源于一種植物的一般的或非特異的細(xì)胞的原生質(zhì)體是有重復(fù)性的和可應(yīng)用的。

因此，本發(fā)明的目的是根供一種由原生質(zhì)體衍生出細(xì)胞簇或愈傷組織的培養(yǎng)原生質(zhì)體的方法，這種方法對(duì)于那些從一種植物的普通的或非特異細(xì)胞產(chǎn)生的原生質(zhì)體是有重復(fù)性的和可應(yīng)用的。

在本發(fā)明的方法中，原生質(zhì)體是在一層100到400微米厚的液體介質(zhì)中培養(yǎng)的。用本方法，原生質(zhì)體是在稍微有氧條件下培養(yǎng)的。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這種有氧條件促進(jìn)了原生質(zhì)體的生長(zhǎng)。

根據(jù)本發(fā)明的方法，不僅是雙子葉植物的原生質(zhì)體，甚至單子葉植物的原生質(zhì)體也能很好地生長(zhǎng)而形成愈傷組織或細(xì)胞簇。

如上所述，按照本發(fā)明的方法，原生質(zhì)體是在大約100至400微米厚的一層液體介質(zhì)中培養(yǎng)的，200至300微米更好些。按照本發(fā)明的方法，原生質(zhì)體是在稍微需氧的條件下培養(yǎng)的，這種需氧條件被認(rèn)為是促進(jìn)原生質(zhì)體的生長(zhǎng)。如果液體介質(zhì)的厚度大于400微米，對(duì)原生質(zhì)體所供的氧就變得不充足了。如果小于約100微米，原生質(zhì)體將受到液體-空氣界面的不利影響。