[其他]表達人類C蛋白的活性的載體和方法無效

申請號：	86100868	申請日：	1986-02-07
公開（公告）號：	CN86100868A	公開（公告）日：	1986-09-24
發明（設計）人：	尼爾斯·烏爾里克·班;羅伯特·約翰·貝克曼;小斯坦利·理查德·賈斯庫納斯;黎蔡美慧;希拉·帕克斯·利特爾;喬治·路易斯·朗;羅伯特·弗蘭克·桑特爾	申請（專利權）人：	伊萊利利公司
主分類號：	C12N15/00	分類號：	C12N15/00
代理公司：	中國專利代理有限公司	代理人：	巫肖南
地址：	美國印第***	國省代碼：	暫無信息
權利要求書：	查看更多	說明書：	查看更多
摘要：
搜索關鍵詞：	表達人類蛋白活性載體方法
鉆瓜網技術展會專利詞庫專利權人專利榜在售專利公布日期熱門專利

【說明書】：

這項發明是關于編碼人類C蛋白活性的DNA物質和重組DNA的克隆載體的。這些載體既可以在真核宿主細胞中表達也可以在原核宿主細胞中表達。這項發明同時關系到被這些新克隆載體所轉化的宿主細胞。轉化的宿主細胞能表達C蛋白或是其前體、衍生物、或它的次級片段。它們無論在自然界或實驗室都從未被合成過。

C蛋白是一種血漿中依賴于維生素K的蛋白，它具有重要生理意義。與其它蛋白質協作，C蛋白可能是降低血液凝固最重要的調節者，而血液凝固將導致血栓形成。換句話說，C蛋白酶系統是抗凝血的主要生理機制。

臨床觀察可以證明C蛋白具有生物學和有力的治療學意義。先天的純合子C蛋白缺失，受影響的家族成員在幼年時期死于暴發性紫癜，這是一種常常導致死亡的擴散性血管內凝血。C蛋白缺失的雜合子，其受影響成員患有嚴重的反復發作的血栓突發病。臨床上已經很肯定用來治療血友病B或是Ⅸ因子缺乏癥的血漿蛋白濃縮物能有效地預防和治療純合子以及雜合子C蛋白缺失所引起的血管內凝塊，而C蛋白則是作為雜質存在于血漿蛋白濃縮物中。在發生血栓時和一些將會導致血栓的疾病，如散發性血管內凝結，重大創傷、重大外科手術和癌癥的情況下，C蛋白的水平特別低。

人類C蛋白是一種絲氨酸蛋白酶原，在肝臟中合成，并存在于血液中。為了表達其完整的生物學活性，C蛋白需要有維生素K參加的翻譯后修飾。成熟的C蛋白具有兩條鏈，由二硫鍵連接，C蛋白酶原是由一條單鏈的前體經有限的蛋白水解而產生的。這種有限的蛋白水解被認為是在肝臟分泌新生多肽時，斷去含33個氨基酸殘基的一段肽鏈（殘基1-33，見下述），除去～9個氨基酸殘基（殘基34-42）的前肽和除去198和199氨基酸殘基，從而形成在酶原中所見到的兩條鏈。酶原的活化，形成具有活性的絲氨酸蛋白酶是靠水解掉一個ARG-LEU肽鏈（211和212殘基）。這次肽鍵斷裂，釋放出一個十肽（殘基200-211）。這十肽原是組成雙鏈分子中較長鏈的氨基末端的。C蛋白被顯著地糖化了，成熟的酶含有～23%的碳水化合物。C蛋白也含有許多特殊氨基酸，包括-羧基谷氨酸和β-羥基天門冬氨酸。-羧基谷氨酸（gla）是由谷氨酸殘基在肝微粒體羧化酶的作用下，以維生素K作為輔因子產生的。由于原核細胞由重組基因表達的蛋白通常既不糖化，不-羧基化，也不β-羥基化，所以這項發明的意義在于首次在沒有正常人的C蛋白的許多轉錄后修飾的情況下，合成了C蛋白的衍生物。這些獨特的衍生物具有巨大地研究價值和臨床價值。下面將詳細討論。

本說明書和權利要求書中名詞作如下規定：

ApR-抗氨芐青霉素表現型或其相關基因。

ep-含有SV40t-抗原（F）基因早期啟動子，t-抗原結合部位、SV40復制起始區的DNA片段。

功能多肽-一種可以提取回收的有生物活性的不均一或均一的多肽或是前體、一種可回收的具生物活性的多肽含有一個不均一的多肽和一部分或全部分均一多肽，或是一個可回收的生物活性融合多肽包含一個不均一的多肽和一個生物一非活性多肽，這個多肽可以專一地被斷裂。

G418????R-抗G418表現型或其相關基因。也可以確定為KmR。

IVS-編碼一個內含子的DNA片段，也叫做一個插入序列。

MSV????LTR-含有小白鼠肉瘤病毒長末端重復區啟動子活性的DNA片段。

新生蛋白（Nascent????protein）-由mRNA轉錄物所翻譯產生的多肽，而未經任何翻譯后修飾。

pA-編碼一個多腺苷酸信號的DNA序列。

啟動子-引導DNA轉錄成RNA的DNA序列。

C蛋白活性-與生物功能或是抗人C蛋白抗體結合活性有關的人類C蛋白的一切性質。

重組DNA克隆載體-任何自身復制的物體，包括但又不限于質粒和噬菌體，它含有凡能加上或已經加上一個或多個外加DNA片段的DNA分子。