[其他]應用生物發光或引入其它外源性遺傳標記檢測或鑒定測試樣品中的微生物

無效

• 申請號: 85109047
• 申請日: 1985-11-13
• 公開（公告）號: CN85109047A
• 公開（公告）日: 1987-06-03
• 發明（設計）人: 西蒙·烏利朱爾;喬納森·庫恩
• 申請（專利權）人: 科技研究公司
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 李雒英,巫肖南

1、用于測定環境中微生物之特殊類型或者種群的方法，其特征在于該方法包含以下步驟：

(a)通過遺傳方法，將得自供體來源的真核或原核的，編碼某種遺傳系統有生物功能的天然或重組的DNA或其操縱部分轉移到受體微生物寄主內，其中所說被引入的供體遺傳系統在寄主體中正常情況下是不存在的或者是很難表達的。和

(b)通過物理、化學或者生物學方法，檢測在所說的寄生微生物體中表達的所說之供體遺傳系統；因此

(c)鑒定所說之寄主微生物的存在。

2、根據權利要求1的方法，其中所說之供給的遺傳系統是表達熒光素酶或者其它發光系統的天然或者重組DNA，所說的其它發光系統有β-半乳糖苷酶、醇脫氫酶或者其它NAD氧化還原酶、轉移酶、堿性磷酸酶或者其它水解酶、裂解酶、異構酶、D-色氨酶氧化酶或者其它氧化酶，通過接合、轉化，或者轉導將供體遺傳系統轉移到寄主微生物內，寄主微生物可選自于下述各菌屬：埃希土菌屬、氣捍菌屬、沙門氏菌屬、志賀氏菌屬、克雷伯氏菌屬、變形捍菌屬、假單胞菌屬、葡萄球菌屬、鏈球菌屬、衣原體屬、枝原體屬、肺炎球菌屬、奈瑟氏菌屬、梭菌屬、芽胞捍菌屬、棒狀捍菌屬、分枝捍菌屬、Camphybacter、弧菌屬、沙雷氏菌屬、腸捍菌屬、普羅威登斯菌屬、色素捍菌屬、布魯氏菌屬、耶爾森氏菌屬、嗜血捍菌屬以及博德特氏菌屬。

3、根據權利要求2的方法，其中所說的供體遺傳系統包含熒光素酶或者產生于生物源的其它發光系統、或者其功能部分;所說的寄主是細菌，其中所說的發光供體系統是通過光的發射，以檢測所說的宿主細菌，其中所說的遺傳系統是用質粒或者噬菌體運載體，通過轉化或者轉導而進行轉移的。

4、根據權利要求3的方法，其中所說的發光系統是產生于費希爾弧菌屬（Vibsiv??fischeri）或者其它微生物源的熒光素酶。

5、根據權利要求4的方法，其中所說的發光系統包含與表達控制序列相連接的重組DNA，該表達控制序列能影響所說的發光系統在所說寄主微生物中的表達。

6、根據權利要求5的方法，其中所說的發光系統的轉移包含轉導，並且所說的運載體是含有在衣殼中包裝了重組體DNA的噬菌體，所說的噬菌體能識別所說的寄主細菌或者其菌株或者與之關系較近的相似菌群。

7、根據權利要求6的方法，其中所說的噬菌體是L28（ATTCCNO40183），或者λL4或者其功能突變體。

8、根據權利要求5的方法，其中所說的發光系統的轉移包含轉化，而所說的運載體是質粒。

9、根據權利要求8的方法，其中所說的轉移運載體是PBTK5或者PAChV-1。

10、根據權利要求3、4、5、6、7、8和9中的任何一項的方法，其中所說的DNA轉移是在有發光系統或者其功能部分的自體誘導物存在下進行的。

11、根據權利要求10的方法，其中是將醛加到所說的DNA進行轉移的環境中。

12、根據權利要求5的方法，其中，轉位子被用于構建含有全部或者部分發光系統的噬菌體。

13、根據權利要求2的方法，其中所說的供體DNA轉移是借助于含有供體遺傳系統或者在其可轉移的復制子上的功能部分的細菌菌株，通過接合細菌染色體或質粒進行的。

14、根據權利要求13的方法，其中所說的供體DNA系統或其功能部分是通過噬菌體引入到所說的細菌菌株中。

15、根據權利要求13的方法，其中所說的供體系統是發光系統或者其功能部分，通過自然或者人工的遺傳重組將其引入到細菌菌株。

16、根據權利要求13的方法，其中所用的細菌株是高頻率重組菌株，此菌株可被帶有供體DNA系統的溫和噬菌體溶源化。

17、根據前面所說的權利要求中的任何一項的方法，其中所說的DNA轉移是在有抗生素（抗細菌劑）存在下進行的，以測定寄主生物對所說的抗生素的敏感性。