[其他]生產抗生素A40926復合物及其純因子PA.PB.A.B.及B0的方法

無效

• 申請號: 85107903
• 申請日: 1985-10-26
• 公開（公告）號: CN85107903A
• 公開（公告）日: 1987-05-06
• 發明（設計）人: 恩里科·塞爾瓦;魯西諾·加斯塔爾多;格拉茨亞·布里塔;安吉洛伯費;貝思·P·格爾德斯蒂英;維托里奧·阿里奧利;吉奧瓦尼·卡薩尼弗朗西斯科·帕恩蒂
• 申請（專利權）人: 格魯波萊佩蒂特公司
• 主分類號: A61K37/02
• 分類號: A61K37/02;C12N1/20;//
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 顧柏棣,辛敏忠

1、一種制備抗生素物質的方法，抗生素物質選自抗生素A40926復合物，抗生素A?40926因子A，抗生素A??40926因子B，抗生素A??40926因子Bo，抗生素A?40926因子A，抗生素A?40926因子PB，其混合物和其加成鹽，其特征在于：

非鹽形式的抗生素A?40926因子A：

A)紫外吸收光譜表現出下列最大吸收：

??????????????????????λ??max(nm)

a)0.1NHCl?????????????????281

b)磷酸鹽緩沖液PH7.38??????281

??????????????????????????300(肩峰)

c)0.1N氫氧化鈉或氫氧化鉀??300

d)甲醇????????????????????282

e)磷酸鹽緩沖液pH9.0???????282

??????????????????????????300(肩峰)

B)紅外吸收光譜表現出下列最大吸收(Cm^-1)：3700-3100，3100-2800(醫藥用潤滑油)；1655；

1620-1560；1510；1480-1410(醫藥用潤滑油)；

1375(醫藥用潤滑油)；1320-1250；1250-1190；1100-950；845；810；720(醫藥用潤滑油)

C)H-NMR波譜表現出下列幾組信號(以ppm表示)，在DMSOd₆中記錄，270MHz，使用TMS作為內標準(0.00ppm)，(α=ppm)：

α0.86(t′s，6H)；1.21(～11H)；1.43(2H)；

2.01(2H)；2.31-2.34(3H)；4-6.2(～16H)；

6.2-8(～23H)；8.44，9.22，9.66(寬帶；動態質子)

2.5-4：來自H₂O峰的干涉

D)相對于TeicoplaninA₂組分2(Rt=20.3分)的滯留時間(Rt)為1.22，反相HPLC的分析條件如下：

柱：Ultrasphere?ODS(5毫米)Altex(Beckman)

4.6毫米(i.d)×250毫米

預備柱：Brownlee?Labs?RP18(5微米)

洗脫液A：

洗脫液B：

洗脫：以洗脫液B在洗脫A中占5%-60%的線性梯度，洗脫40分鐘

流速：1.8毫升/分

紫外檢測：254nm

內標準：Teicoplanin A₂組分2(GruppoLepetit S.P.A)

在相同的條件下，相對于睪酮(Roussel?Uclaf)的滯留時間為0.60。

E)元素分析，樣品在惰性氣體(△W4.6%)中以140℃先干燥之后進行，指出了各組分(平均)百分數的大約值：

碳55.82%，氫5.17%，氮6.31%，氯(全部)4.24%，氯(離子)0.37%，

900℃空氣中無機殘留為1.2%

F)酸堿滴定，2-甲氧基乙醇(MCS)：水，4∶1，在加入稍過量的HCl之后，用KOH滴定，指出4個可離子化功能區具有以下的pKMCS：4.6，5.6，7。2，9.2，

G)Rf值為0.24，相對于Teicoplanin A₂組分2的Rf為0.70，層析系統如下：

5%(W/V)Na₂SO₄溶液 70

乙腈??????????????30

使用硅烷化硅膠60F₂₅₄Merck板(層厚0.25毫米)顯色：

--紫外明亮

--Pauly試劑，黃色，即重氮化對氨基苯磺酸[J.Chrom-atog。20，171(1965)，Z.Physiol.Chem.292，99(1953)]

--在最小Davis培養基上使用B.subtilis?ATCC?6633生物自顯影，

H)分子量為1716，由FAB-MS波譜推出，其表現M+H的峰為1717

非鹽形式的抗生素A??40926??因子B：

A)紫外吸收光譜表現出下列最大吸收：

????????????????????????λmax(nm)

a)0.1NHCl?????????????????282

b)磷酸鹽緩沖液pH7.38??????281

??????????????????????????300(肩峰)

c)0.1N氫氧化鈉或氫氧化鉀??300

d)磷酸鹽緩沖液PH9.0???????283

??????????????????????????300(肩峰)

e)甲醇????????????????????282

B)紅外吸收光譜表現出下列最大吸收(cm^-1)：

3700-3080，3080-2700(醫藥用潤滑油)；1720-1625；1625-1560；1505；1460(醫藥用潤滑油)；1375(醫藥用潤滑油)；1295；1230；1210；1150；1100-1040；1030；1015；970；890；840；810；720(醫藥用潤滑油)

C)¹H-NMR波譜表現出下列各組信號(以ppm表示)，在DMSOd₆中記錄的¹H-NMR 270MHz，使用TMS作為內標準(0.00ppm)，(α=ppm)：α0.85(d，異丙基CH₃′S)；1.15(～13H)；1.44(～2H)；2.02(2H)；2.32-2.35(3H)；4-6.1(～6H)；6.1-8(～23H)；8.52，9.30，9.68(寬帶，動態質子)

2.5-4：來自H₂O峰的干涉

D)滯留時間(Rt)為1.22，相對于Teicoplanin A₂組分2(Rt=20.3分)的滯留時間為1.27，反相HPLC分析的條件如下：

柱：Ultrasphere?ODS(5微米)Altex(Beckman)4.6毫米(i.d.)×250毫米

預備柱：Brownlee?Labs?RP18(5微米)

洗脫液A：

洗脫液B：

洗脫：以洗脫液B在洗脫液A中占5%～60%的線性梯度，洗脫40分鐘

流速：1.8毫升/分

紫外探測：254納米

內標準：Teicoplanin A₂組分2(GruppolepetisS.P.A)

E)元素分析，樣品先在約140℃惰性氣體中(Δw9.6%)干燥，指出各組分(平均)百分數大約為：碳54.09%；氫?5.13%；氮?6.34%；氯(全部)4.12%；氯(離子)0.39%；

900℃空氣中無機灰份為5%；

F)酸堿滴定，2-甲氧基乙醇(MCS)：水，4∶1，當加入稍過量的HCl(pH2.7)后用KoH滴定，其表明4個可離子化功能區具有如下所示的pKmcs：

4.5，5.6，7.2，9.2，

G)Rf值為0.21，相對于Teicoplanin A₂組分2的Rf值為0.53，層析系統如下：

5%(w/v)Na₂SO₄溶液 70

乙腈??????????????30

使用硅烷化硅膠60F₂₅₄Merck板(層厚0.25毫米)顯色：

--紫外明亮

--Pauly試劑，黃色，即重氮化對氨基苯磺酸[J.chromatog20，171(1965)，Z.Physiol.Chem.292，99，(1953)]

--在最小Davis?培養基上用B.subilis?ATCC?6633生物自顯影

H)分子量為1730，由FAB-MS波譜推出，其表示M+H峰在1731

非鹽形式的抗生素A?40926因子B

A)紫外吸收光譜表明以下最大吸收：

???????????????????????λ?max(nm)

a)0.1N?HCl????????????????282

b)磷酸鹽緩沖液PH7.38??????281

??????????????????????????300(肩峰)

c)0.1N氫氧化鈉或氫氧化鉀??300

d)磷酸鹽緩沖液pH9.0???????283

e)甲醇????????????????????300(肩峰)

??????????????????????????282

B)紅外吸收光譜表現出下列最大吸收(cm^-1)：3700-3080，3080-2700(醫藥用潤滑油)；1720-1625；1625-1560；1505；1460(醫藥用潤滑油)；1375(醫藥用潤滑油)；1295；1230；1210；1150；1100-1040；1030；1015；970；890；840；810；720(醫藥用潤滑油)

C)¹H-NMR波譜表現出下列幾組信號(以ppm表示)，在DMSOd₆中記錄¹H-NMR，270MHz，使用TMS作為內標準(0.00ppm)，(α=ppm)：

α0.85(d，異丙基CH₃′S)；1.15(～13H)；1.44(～2H)；2.02(2H)；2.32-2.35(3H)；4-6.1(～16H)；6.1-8(～23H)；8.52，9.30，9.68(寬帶，動態質子)2.5-4：來自H₂O峰的干涉

D)相對于Teicoplanin A₂組分2(Rt=20.3分)的滯留時間(Rt)為1.22，反相HPLC分析的條件如下：

柱：Ultrasphere?ODS(5微米)Altex(Beck-man)4.6毫米(i.d)×250毫米

預備柱：Brownlee?Labs?RP18(5微米)

洗脫液A：

洗脫液B：

洗脫：以洗脫液B在洗脫液A中占5%～60%的線性梯度洗脫40分鐘

流速：1.8毫升/分

紫外檢測：254nm

內標準：Teicoplanin A₂組分2(Gruppo LepetitS.P.A)

E)元素分析，樣品先在140℃惰性氣體(Δw9.6%)中干燥，指出各組分(平均)百分數大約為：

碳54.09%，氫5.13%，氮6.34%，氯(全部)4.12%，氯(離子)0.39%，

在900℃空氣中無機灰分為5%

F)酸堿滴定，2-甲氧基乙醇(MCS)：水，4∶1，加入稍過量HCl之后用KOH滴定，表明有4個可離子化的功能區具有下述pKmcs；4.5，5.6，7.2，9.2

G)Rf值為0.21，相對于Teicplanin A₂組分2的Rf值為0.53，層析系統如下：

5%(w/v)Na₂SO₄溶液 70

乙腈??????????????30

使用硅烷化硅膠60F₂₅₄Merck 板(層厚0.25毫米)

顯色：

--紫外明亮

--Pauly?試劑，黃色，即重氮化對氨基苯磺酸[J.Chrom-atog?20，171(1965)，Z.Physiol.Chem.292，99，(1953)]

--在最小Davis培養基上用B.subtilis?ATCC?6633生物自顯影

H)分子量為1730，由FAB-MS波譜推出，其表現為M+H峰在1731

非鹽形式的抗生素A?40926?因子PA

A)紫外吸收光譜表現出下列最大吸收：

????????????????????λmax(nm)

a)0.1N?HCl????????????282

b)0.1N氫氧化鉀????????300

c)磷酸鹽緩沖液pH7.38??282

??????????????????????300(肩峰)

d)磷酸鹽緩沖液pH9.0???283

??????????????????????300(肩峰)

B)紅外吸收光譜表明下列最大吸收(cm^-1)：

3700-3100，3000-2800(醫藥用潤滑油)；1760-1710；1655；1620-1550；1505；1460(醫藥用潤滑油)；1375(醫藥用潤滑油)；1260，1250-950；845；805；720(醫藥用潤滑油)

C)¹H-NMR波譜表明下列各組信號(以ppm計)，在DMSOd₆中記錄¹H-NMR，270MHz，用TMS為內標準(0.00ppm)，(α=ppm)：

0.86，d′s(CH₃)；1.15-1.22，m(CH₂)n；1.41，m(CH₂)；2.01，s(CH₃)；2.01，m(CH₂)；2.28，s(N-CH₃)；4.26-5.96，br(縮肽的和芳族的CH′s)；6.33-7.73br(芳族的CH′s和縮肽的NH′s)

br=寬峰

d=雙峰

dd=雙倍雙峰

m=多峰

s=單峰

t=三峰

D)相對于Teicoplanin A₂組分2(Rt=20.3分)的滯留時間(Rt)為1.15，反相HPLC分析的條件如下：

柱：Ultrasphere?ODS(5微米)Altex(Beckman)4.06毫米(i.d)×250毫米

預備柱：Brownlee?Labs?RP18(5微米)

洗脫液A：

洗脫液B：

洗脫：以洗脫液B在洗脫液A中占5%-60%的線性梯度洗脫40分鐘

流速：1.8毫升/分

紫外檢測：254nm

內標準：Teicoplanin A₂組分2(Gruppo Lepetit S.P.A)

E)相對于Teicoplanin A₂組分2的Rf值為0.62，層析系統如下：

5%(w/v)Na₂SO₄溶液 70

乙腈??????????????30

使用硅烷化硅膠60F₂₅₄Merck板(層厚0.25毫米)

顯色：

--紫外明亮

--Pauly試劑，黃色，即重氮化對氨基苯磺酸[J.Chromatog.20，171，(1965)，Z.Physiol.Chem.292，99，(1953)]

--在最小Davis培養基上用B.subtils?ATCC?6633生物自顯影

F)分子量約1758，由FAB-MS波譜推出，其一群峰中最大峰為1761，FAB-MS分析的工作條件如下：

儀器：裝有FAB槍Ion?Tech?的?VGMod?ZAB?SE

條件：陽性FAB，Xe

加速電壓為8Kv

基質：硫代甘油-甘油1/l(v/v)

非鹽形式的抗生素A?40926因子?PB

A)紫外吸收光譜表現出下列最大吸收：

????????????????????λmax(nm)

a)0.1N?HCl????????????282

b)0.1N氫氧化鉀????????300

c)磷酸鹽緩沖液pH7.38??282

??????????????????????300(肩峰)

d)磷酸鹽緩沖液pH9.0???282

??????????????????????300(肩峰)

B)紅外吸收光譜表現出下列最大吸收(cm^-1)：

3700-3100，3000-2800(醫藥用潤滑油)；1761-1710；1655；1620-1560；1605；1480-1420(醫藥用潤滑油)；1375(醫藥用潤滑油)；1320-1270；1230-1190；1150，1120-920；845；810；720(醫藥用潤滑油)

C.1)¹H-NMR波譜表現出下列各組信號(以ppm表示)，在DMSOd₆中，270MHz用TMS作為內標準(0.00ppm)，(α=ppm)多重性(屬性)：

0.84，d(異丙基CH₃′s)；1.17，m(CH₂)n；1.43m(CH₂)，1.99，s(CH₃)；2.01，m(CH₂)；2.31，s(N-CH₃)；2.79，dd(C-H)；3.70，m(C-H)；4.06-6.02，br(縮肽的或芳族的CH′s)；6.45-7.74，br(芳族的CH′S和縮肽的NH′s)；8.19-9.99，br(縮肽的NH′s和酚的OH′s)

C.2)¹H-NMR波譜表現出下列幾組信號(以ppm計)，在DMSOd₆+CF₃COOD中，270MHz，以TMS為內標準(0.00ppm)，(α=ppm)多重性；(屬性)：

0.84，d(異丙基CH₃′s)；1.13，m(CH₂)n；1.40，m(CH₂)；1.98，s(CH₃)；2.00，m(CH₂)；2.92，dd(C-H)；3.29-3.71，m(糖c-H′s)；4.07-6.09，s和m(縮肽的和芳族的CH′s)；6.45-7.83，s和m(芳族的CH′s和縮肽的NH′s)；8.17-10.38(縮肽的NH′s，酚的OH′s)

D)滯留時間(Rt)為1.27，相對于Teicoplanin A₂組分2(Rt=20.3分)的滯留時間為1.32，反相HPLC分析層析的條件如下：

柱：Ultrasphere?ODS?(5微米)?Altex(Beckman)?4.6毫米(i。d)×250毫米

預備柱：Brownlee?Labs?RP18(5微米)

洗脫液A：

洗脫液B：

洗脫：以洗脫液B在洗脫液A中占5%-60%的線性梯度洗脫40分鐘

流速：1.8毫升/分

紫外檢測：254nm

內標準：Teicoplanin A₂組分2(Gruppo Lepetit S.P.A)

E)相對于Teicoplanin A₂組分2的Rf值為0.53，層析系統為：

5%(w/v)Na₂SO₄溶液 70

乙腈??????????????30

使用硅烷化硅膠60F₂₅₄Merck板(層厚0.25毫米)

顯色：

--紫外明亮

--Pauly試劑，黃色，即重氮化對氨基苯磺酸[J.Chrom-atog.20，171(1965)，Z.Physiol.Chem.292，99，(1953)]

--在最小Davis培養基上用B.subtilis?ATCC?6633

生物自顯影

F)分子量為1772，自FAB-MS波譜推出，其一群峰中的最大峰為1776，FAB-MS分析的工作條件如下：

儀器：裝備有FAB槍Ion?Tech?的VG?Mod?ZAB?SE

條件：陽性FAB，Xe

加速電壓為8KV

基質：硫代甘油-甘油1/l(V/V)；

該方法包括，在有碳原，氮源和無機鹽存在的浸沒厭氧條件下，培養Actinomadura?sp。ATCC39727菌，或抗生素A?40926生產菌的突變體或其變種，從發酵液中分離并回收所述的抗生素，如果需要，將其轉變為所需要的鹽。