[其他]將肝炎A病毒凈化及三重無性繁殖

無效

• 申請號: 85107525
• 申請日: 1985-10-11
• 公開（公告）號: CN85107525A
• 公開（公告）日: 1987-04-15
• 發明（設計）人: 理查德·J·戴默爾;斯蒂芬·M·范斯通;伊恩·D·格斯特;羅伯特·H·珀塞爾
• 申請（專利權）人: 美國政府(美國商務部代表)
• 主分類號: A61K39/29
• 分類號: A61K39/29
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 劉元金,羅宏

肝炎A病毒（HAV）的分布遍達世界各地。美國每年有高達有高達100，000宗肝炎案是與這種病毒有關的，而且正如其他先進國家一樣，有大概20-25%的臨床肝炎屬于此類。這種病毒在發展中國家的傳染性很高，而實際上在這些地區中百分之一百的十歲左右的人口，差不多都受到傳染。它主要是通過排泄物-口腔污染傳播，又與很多水傳播或食物傳播的疾病的傳染有關。但人與人之間的接觸仍是最常見的方法。HAV是很少以胃腸外的方法傳播的。

美國專利4，164，566（普羅沃斯特公司）指導怎樣在體外培養肝炎A病毒細胞培養物。普羅沃斯特公司使用一種不同的HAV株，這種HAV株最少需要在一隻非人類的靈長目動物內有五條通道去生產HAV。美國專利申請366，165號發明人的目的是要證明HAV可以被孤立，并且在直接從人類臨床樣品中取出初級非洲綠猴腎臟（AGMK）細胞培養物中，可以順序地排列。

Daemer????et????al，感染與免疫，Vol????32，NO.1，April????1981，pp.388-393。

Purcell????et????al，“肝炎A病毒”，在印制中。

肝炎A病毒的HM-175株在本申請提交前已儲存在美國典型培養物保臟中心，因此令儲存的培養物有永久性，同時在頒發專利時，公眾也可獲得該種培養物。

把肝炎A病毒HM-175株的母籽苗組無性繁殖三倍，便得到一種有效的疫苗，可在人猿及其他如中南美洲小猴的靈長目動物中，產生抗體，但不會產生出疾病。人猿被野生型病毒考驗時所產生的保護作用，是疫苗的重要標記。

在初級非洲綠猿腎臟細胞培養物內的通道10和20適應了人類肝炎A病毒的細胞培養物被發現在人猿中有弱化的情況，但卻產生血清轉化作用，如表1所顯示，肝炎A抗體被誘發，而又沒有肝病的生物化學跡象。曾經被弱化株感染，及產生肝炎A抗體的人猿，除非試驗在初步免疫反應發展中的康復期進行，否則被感染性肝炎A病毒試驗時，都不會出現肝炎A病毒（表2）。接受同樣物質的防疫注射的中南美洲小猴卻培養出肝炎，不過與用野生型病毒注射的比較，卻沒有那么猛烈（表1與圖1）。有細胞組織培養物通道的病毒之減弱穩定性，可以用從曾作防疫注射的動物取得的嚴重期病毒媒，在別的人猿上作防疫注射（透皮膚的，最好是靜脈內的）來證明。接受的動物并沒有肝炎的生物化學跡象，但卻產生了肝炎A抗體。

肝炎A病毒的HM-175株的母籽苗組在通道層10、20和30中，以最后稀釋液無性繁殖三倍。從通道層20取得的細胞系會被判斷是否在人猿內有減弱的跡象。在兩個受試驗的細胞系中，經預防注射的人猿只產生微量，或甚至完全不產生肝炎。在細胞系＃1中，六隻動物只有三隻產生抗體，而在細胞系＃2中，四隻結預防注射的動物中，有三隻產生抗體。

使用肝炎A病毒HM-175株的三重無性繁殖病毒物質，證明它作為活HAV，是人猿的有效疫苗。

這種疫苗適用于哺乳類動物或靈長目動物，包括人、人猿和中南美洲小猴。用于制備疫苗的統一病毒方面，三重無性繁殖的病毒性物質（3X）比兩重無性繁殖（2X）的病毒更均勻。此處敘述的母籽苗組，是在通道層10與20以最后稀釋液，從三倍無性繁殖的病毒得來的。（Cunningham，A????Laboratory????Guide????in????Virology，5th????ed，Burgess????Pub.Co.，1963，pp.144-145）。沖稀的目的是要從單獨一個病毒粒子中產生過程中稀釋度最高的正管，因而為產物提供了生物統一性。

在用最后稀釋液無性繁殖方面，3X是最適宜于生產統一的病毒或疫苗。3X的引用，是與以下引用的文獻相等的：Lennett????and????Schmidt，“Diagnostic????Procedure????for????Viral????and????Ricksettial????Infections，”American????Public????Health????Association，5ed.，1979，p????102;及Dulbecco????and????Vogt，“Plague????Formation????and????Isolation????of????Pure????Lines????with????Poliomyelitis????Viruses，”J????Exp.Med.，99：167-182，1954。

把人類肝炎A病毒HM-175株運進這國家中，在感染與免疫，32（1），April????1981，pp.388-393有描述。

例1