[其他]起交叉反應(yīng)的環(huán)周子孢子蛋白保護(hù)性抗原決定基的制造方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 85107448
• 申請日: 1985-10-10
• 公開（公告）號: CN85107448A
• 公開（公告）日: 1987-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尤利斯·沃加拉;安德里斯·魯茨;阿特羅·弗爾拉;魯思·S·納森威格;維克托爾·N·納森威格
• 申請（專利權(quán)）人: 紐約大學(xué)
• 主分類號: C07K7/04
• 分類號: C07K7/04;A61K37/02;A61K39/00
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利代理部
• 代理人: 辛敏忠,顧柏棣

本發(fā)明提供對瘧疾有保護(hù)性免疫作用的多肽抗原的制造方法及，將其用于制備疫苗的方法。該抗原具有與環(huán)周子孢子蛋白氨基酸順序片段相對應(yīng)的氨基酸順序，它們位于這些蛋白串聯(lián)重復(fù)部分的外部。本發(fā)明的抗原可用來誘發(fā)抗體的形成，這種抗體不僅能識別同種瘧原蟲抗原，也可識別它種瘧原蟲抗原。

本申請參照下述各專利的發(fā)明：

（a）美國專利，No4，466，917，Nussenzweig，R.等人，發(fā)表于1984年8月21日。

（b）Ellis，J.等人已轉(zhuǎn)讓的未決美國專利申請，No574，553，題目是：“保護(hù)性抗原肽”，于1984年1月27日申請。和

（c）Ellis，J.等人已轉(zhuǎn)讓的未決美國專利申請，No633，147，于1984年7月23日申請，題目是：“惡性瘧原蟲環(huán)周子孢子蛋白的保護(hù)性抗原肽”。

大多情況下，瘧疾是通過感染瘧疾病原蟲蚊子的叮咬，把子孢子（瘧疾寄生蟲高度免疫原的形式）注入宿主的血液中，從而引起發(fā)病的。子孢子的免疫原性，既使不是唯一地但也大多地存在于一個單獨(dú)的抗原即環(huán)周子孢子（CS）蛋白中。（F.Zavala，A.H.Cochrane，E.H.Nardin，R.S.Nussengweig和V.Nussenzweig等人在《試驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》（J.Exp.ned），1983年，157卷1947頁，已作了詳述。G.N.Godaon等人在《自然》（Nature）1983年，305卷29頁，報環(huán)周子孢子蛋白（CS蛋白），是蚊子唾液中子孢子表面膜多肽的成分之一。該子孢子系由哺乳動物屬的瘧疾寄生蟲而來。子孢子的強(qiáng)免疫原性主要是與CS蛋白有關(guān)。此蛋白是子孢子階段所特有，具有重復(fù)的抗原決定基的免疫顯性區(qū)。諾（耳斯）氏瘧原蟲（猴）CS蛋白從N端到C端的重復(fù)序列是：谷氨酰胺-丙氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-丙氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酰胺-脯氨酸。而惡性瘧原蟲CS蛋白的重復(fù)四肽序列是：天冬酰胺-丙氨酸-天冬酰胺-脯氨酸。由多個相同或類似的重復(fù)的氨基酸序列所組成的合成肽顯示有抗原性，并可用它進(jìn)一步制造瘧疾疫苗。然而，令人遺撼的是，從CS蛋白免疫顯性區(qū)得到的肽，它們之間很少顯示同質(zhì)性，因而它們只具有種屬特異性的抗原。

由于CS蛋白重復(fù)抗原決定基的免疫顯性迄今，還不能肯定：不含重復(fù)顯性序列的CS蛋白的其它部分，是否能誘導(dǎo)出影響寄生蟲存活的抗體。很明顯，免疫抗原性本身并不能使那些諸如抗子孢子保護(hù)性抗原的非重復(fù)序列的肽具有實(shí)用性，因?yàn)檫@些片段需要在CS分子暴露的表面上才可被抗體識別。

本發(fā)明的一個目的是鑒定某一種屬瘧原蟲環(huán)周子孢子表面蛋白的一些區(qū)域，即含該蛋白非重復(fù)性抗原決定基的區(qū)域。

本發(fā)明的另一個目的是鑒定CS蛋白非重復(fù)性抗原決定基，從而生產(chǎn)一種抗瘧疾疫苗。

本發(fā)明還有一個目的是鑒定和合成肽（相當(dāng)于CS蛋白非重復(fù)性抗原決定基）。該肽能在哺乳動物中誘導(dǎo)形成抗體，此抗體又可反過來去識別CS蛋白，特別是識別在子孢子表面上的CS蛋白。

本發(fā)明進(jìn)一步的目的是鑒定與合成抗體，此誘導(dǎo)形成的抗體可識別多種瘧原蟲的CS蛋白。

本發(fā)明另一目的是以鑒定該肽為前提，進(jìn)而制造一種合成的瘧疾疫苗。

本發(fā)明還有一個目的是進(jìn)一步生產(chǎn)一種用于制作哺乳動物用的瘧疾疫苗的免疫因子。

本發(fā)明旨在生產(chǎn)某一種屬瘧原蟲環(huán)周子孢子表面蛋白的某一抗原決定基肽，該肽不是該蛋白重復(fù)的免疫顯性抗原決定基序列的肽，但該肽能在宿主中誘導(dǎo)形成識別環(huán)周子孢子表面蛋白的抗體。

本發(fā)明的肽是通過它誘導(dǎo)形成的抗體與CS蛋白相結(jié)合而被識別的。該抗體不但與產(chǎn)生此抗體的某種瘧疾的CS蛋白結(jié)合，也能與其它種瘧疾的CS蛋白質(zhì)相結(jié)合。因?yàn)椋庖唢@性區(qū)外的CS蛋白的序列是廣泛同質(zhì)性的。一旦一種這樣的肽被鑒定，其它具有同樣性質(zhì)的肽的氨基酸序列（或核苷酸序列）就能容易地通過比較不同種CS蛋白的序列而鑒定出來。這些肽對于制造合成瘧疾疫苗是非常重要的成分。這些瘧疾疫苗可用人工合成的方法，也可用遺傳工程的技術(shù)來制造。

圖1是諾（耳斯）氏瘧原蟲CS蛋白細(xì)胞內(nèi)前體的圖解。

圖2是柏氏瘧原蟲（小白鼠）子孢子萃取物與本發(fā)明合成的N和C肽抗體相作用的Western免疫吸附放射自顯影圖。

圖3是諾氏瘧原蟲和惡性瘧原蟲CS蛋白免疫顯性決定基外的蛋白片段的圖解。這些片段的排列達(dá)到高度的同質(zhì)性。