[其他]抗尿激酶單克隆抗體，帶有它的基質(zhì)，其試驗方法和使用它的生化試驗藥盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 85107184
• 申請日: 1985-09-27
• 公開（公告）號: CN85107184A
• 公開（公告）日: 1986-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬里·魯薩·諾里;安格勞·科蒂;阿多夫·索芬蒂尼;吉奧瓦尼·卡薩尼;弗朗西斯克·帕蘭蒂
• 申請（專利權(quán)）人: 格魯波萊佩蒂特公司
• 主分類號: A61K39/44
• 分類號: A61K39/44;G01N33/53;G01N33/577;B01D15/08
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利代理部
• 代理人: 顧柏棣,辛敏忠

本發(fā)明涉及一類新的Ig G₁單克隆抗體，它們針對人類尿激酶上的抗原決定部位，選擇性地與高分子量的尿激酶（5400）或其單鏈前體相結(jié)合，而不與小分子量的尿激酶（3300）結(jié)合，并具有對尿激酶的恒定的親和性，該親和性適用于以免疫吸附為基礎(chǔ)的純化系統(tǒng)而不損害尿激酶的酶活性。

本發(fā)明的單克隆抗體，當(dāng)與適宜的基質(zhì)結(jié)合時，就會給出一種能從生物原料中提純出人類尿激酶或其單鏈前體的免疫吸附劑基質(zhì)。這些免疫吸附劑，因為具有抗體對其抗原的最佳的親和力，所以也特別適于工業(yè)上提純?nèi)祟惸蚣っ富蚱鋯捂溓绑w。

本發(fā)明的單克隆抗體，還特別適用于檢測大分子量人類尿激酶（HMW尿激酶）或其單鏈前體的分析方法。例如以免疫熒光為基礎(chǔ)的檢測方法，放射性免疫檢測方法和酶學(xué)免疫檢測方法。

人類尿激酶是已知的血纖維蛋白溶酶原的激活物（PA），主要由腎細(xì)胞產(chǎn)生。

其主要生理學(xué)作用可能是作為血纖維蛋白系統(tǒng)的一種激活物，因而可用尿激酶治療急性的血管病。例如心肌梗死，中風(fēng)，肺栓塞，深部靜脈血栓形成，外周動脈阻塞，出血及視網(wǎng)膜靜脈阻塞。

血纖維蛋白溶酶原激活物（PA）是可將血纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)變成血纖維蛋白溶酶的絲氨酸蛋白酶，其為一種對血凝塊的主要成分血纖維蛋白有高度特異性的蛋白酶。至少已自培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系中分離出的兩種不同類型的免疫學(xué)的PA：即與組織血纖維蛋白溶酶原激活物（TPA）有關(guān)的PA（參見Rijken????D.C.，Wijngaard????G.Iaal-de????Jong????M.，Welbergen????J[1979]Biochim????Biophys????Acta????380，140）和與尿的激活物（UPA）有關(guān)的PA（又稱尿激酶）（參見Williams????J.R.B.[1951]????Br.J.Exp.Pathol????39.530）。

這一種尿激酶類型物最初是以兩條鏈之蛋白質(zhì)的形式從尿中提純出來的，而近來則以酶原形式（稱作原尿激酶），從人類表皮樣癌細(xì)胞株HEp3（參見Wun????T.D.，Ossowsky????L.和Reich????E.[1982]J.Biol????Chem，257，7262）glyoblastoma細(xì)胞（參見Nielsen????L.S.等人，[1982]Biochem????21，6410）尿（參見Husain????S.C.等人，[1983]AArch????Biochem????Biophys????220，31）以及人腎永久細(xì)胞系TCL-598（參見Kohno????T.等人[1984]Biotechnol????2，628）中分離得到。最近，也已從人類擬表皮癌細(xì)胞系A(chǔ)431的上清液中鑒定出了一種免疫學(xué)上與尿激酶有關(guān)的酶原。

這種原尿激酶酶原是一種分子量為50-54000的單鏈蛋白質(zhì)，沒有或有很低的酰胺基分解活性，具有高度血纖維蛋白親和力，它對二異丙基氟磷酸鹽的處理有抗性，可被血漿抑制劑失活（參見Gurewich等人[1984]J.Clin????Invest????73????1731），并且用血纖維蛋白溶酶處理可轉(zhuǎn)換成有兩條鏈的活性酶（尿激酶）。

人類尿激酶分子已被以幾種活性形式分離出來，但主要是高分子量形式（分子量約54000）和低分子量形式的（分子量約33000）。低分子量形式（LMW）是由大分子量形式（HMW）經(jīng)酶切轉(zhuǎn)換而來的。

高分子量形式由分子量為30，000的重鏈（B鏈）和分子量為20，000的輕鏈（A鏈）以二硫鏈連接而成。低分子量形式則由包含活性位點的整個B鏈和一條由A鏈轉(zhuǎn)化而來的蛋白水解抗性小片段（MW＝2427）以二硫鏈連接而成。A鏈經(jīng)蛋白水解而分成一條分子量18000的片段和一條分子量大于2427道爾頓的片段。

就其在體內(nèi)促進血塊分解的活性而言，似乎低分子量的尿激酶不如高分子量尿激酶（M.Samama等人，Thromb.Haemostas.40，578-580，[1979]和G.Hurano等人，Blood，55，430-436[1980]）。目前，人類尿激酶主要是用常規(guī)純化技術(shù)從生物原料中獲得，例如從人尿，組織培養(yǎng)物，特別是正常的或腫瘤性的腎細(xì)胞培養(yǎng)物中得到。人類尿激酶酶原一旦被激活，可以起到與尿激酶相類似的生理學(xué)作用。近來，對用DNA技術(shù)制備人類尿激酶已有報道（參見歐洲公開專利申請92182號（Eur.Pat.Appln.Publ）]。